应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因过表达后WB 检测不到表达
71/1返回列表
查看: 4596  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yida1520034

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因过表达后WB 检测不到表达 已有1人参与

研究的基因存在三个转录本，1.全长，2.外显子4缺失，外显子4、5缺失，分别将这三段基因序列用慢病毒包装后在肝癌细胞中过表达后提蛋白做WB，导入全长的基因WB 有条带，后两个序列导入之后检测不到条带。之前将三段基因用质粒做载体导入293T细胞做WB 都能检测到表达，但是转染肝癌细胞转染效率极低，所以换用慢病毒，按说慢病毒包装之后过表达应该更高才对，怎么会出现这样的情况？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-11-09 00:00:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ywwabc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-11-12 22:40:58
慢病毒包装后转染时筛选稳转细胞不表达，还是仅仅转染几天就检测？可有带荧光看一下转染效率？转染多久？慢病毒转染很慢的，最好转96H以上！
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2017-11-09 17:29:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianwan1999

木虫 (小有名气)
(1)293细胞和肝癌细胞有区别，细胞内环境不一样;(2)不同片段的构象不同，有的构象容易被降解;(3)

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-11-12 17:10:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yida1520034

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ywwabc at 2017-11-09 17:29:33
慢病毒包装后转染时筛选稳转细胞不表达，还是仅仅转染几天就检测？可有带荧光看一下转染效率？转染多久？慢病毒转染很慢的，最好转96H以上！

慢病毒带绿色荧光，稳筛之后几乎百分之百带荧光，稳转之后提RNA做qPCR有表达，提蛋白做的western blot没有条带

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-11-13 20:22:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yida1520034

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by qianwan1999 at 2017-11-12 17:10:22
(1)293细胞和肝癌细胞有区别，细胞内环境不一样;(2)不同片段的构象不同，有的构象容易被降解;(3)

现在转293T细胞western blot 也检测不到表达。想不明白什么原因

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-11-13 20:23:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

景致依然

新虫 (初入文坛)
请问你转293T细胞的效率多高，20%能做WB么

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2018-07-30 09:09:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

新星加油

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yida1520034 at 2017-11-13 20:23:55
现在转293T细胞western blot 也检测不到表达。想不明白什么原因
...

你好，请问当时这个问题解决了吗？怎么解决的呀？我现在mRNA 水平有表达，但是蛋白WB做不出来条带。比较崩溃。能否分享一下解决的过程呢，谢谢
赞一下 回复此楼
不只要一腔热血，一定要踏踏实实。戒掉各种懒惰及拖延症好吗
7楼2021-06-21 16:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yida1520034 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 263求调剂 +5 yqdszhdap－ 2026-03-22 5/250 2026-03-23 10:23 by 呆呆师姐
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 305分求调剂（食品工程） +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 材料工程（专）一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 材料 336 求调剂 +3 An@. 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭