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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 目的质粒怎么导入大肠杆菌DH5α
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x8m8q8

新虫 (小有名气)

[求助] 目的质粒怎么导入大肠杆菌DH5α 已有2人参与

目的质粒怎么导入大肠杆菌DH5α？
还有问一下，构建工程菌的大致流程：1、引物合成 2、基因组DNA提取 3、以2为模板PCR扩增目的基因 4、目的质粒导入大肠杆菌 5、提取含有目的质粒大肠杆菌中的质粒 6、将5中的质粒与目的基因连接 7、制备感受态细胞 8、将6转入感受态细胞 9、提取质粒到另一种大肠杆菌中 10、将9中的大肠杆菌和原菌进行接合转移 11、挑取阳性克隆鉴定
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1楼 2017-11-07 09:44:58
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x8m8q8

新虫 (小有名气)
大致流程对吗？感觉有点乱
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2楼2017-11-07 09:45:26
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迟落的夕阳

铁虫 (小有名气)
嗯，差不多

发自小木虫Android客户端
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3楼2017-11-07 10:19:19
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wkj5257

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

普通的大肠杆菌转化呀
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分子生物学，未来科技的领导者
4楼2018-07-06 16:29:44
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阿门阿前1991

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-07 01:42:51
1.取2μl质粒转化至100μl感受态中，冰浴30min后，42℃热激90s，再冰浴2min；
2.加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm培养45min后，离心全涂至对应抗性的LB平板上；
3.将平板正向培养1h；再倒置培养12h~16h；
4.挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，
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总会出现一个温柔的人，让你变得温暖，然后默默离开。
5楼2018-07-06 16:58:28
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