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x8m8q8

新虫 (小有名气)

[求助] 目的质粒怎么导入大肠杆菌DH5α 已有2人参与

目的质粒怎么导入大肠杆菌DH5α?
还有问一下,构建工程菌的大致流程:1、引物合成 2、基因组DNA提取 3、以2为模板PCR扩增目的基因 4、目的质粒导入大肠杆菌 5、提取含有目的质粒大肠杆菌中的质粒 6、将5中的质粒与目的基因连接 7、制备感受态细胞 8、将6转入感受态细胞 9、提取质粒到另一种大肠杆菌中 10、将9中的大肠杆菌和原菌进行接合转移 11、挑取阳性克隆鉴定
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阿门阿前1991

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-07 01:42:51
1.取2μl质粒转化至100μl感受态中,冰浴30min后,42℃热激90s,再冰浴2min;
2.加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm培养45min后,离心全涂至对应抗性的LB平板上;
3.将平板正向培养1h;再倒置培养12h~16h;
4.挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,
总会出现一个温柔的人,让你变得温暖,然后默默离开。
5楼2018-07-06 16:58:28
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x8m8q8

新虫 (小有名气)

大致流程对吗?感觉有点乱
2楼2017-11-07 09:45:26
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迟落的夕阳

铁虫 (小有名气)

3楼2017-11-07 10:19:19
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wkj5257

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

普通的大肠杆菌转化呀
分子生物学,未来科技的领导者
4楼2018-07-06 16:29:44
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