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用氯仿/甲醇=2:1方法提取脂质，是否可以使用分析纯的试剂
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求助求助！！！按照http://www.k-state.edu/lipid/ana ... hodology/index.html的方法提取植物脂质，用分析纯的氯仿是否可以？提取步骤用分析纯，之后会吹干，只有纯脂质和杂质，然后用HPLC级的氯仿上机做ESI-MS/MS，会不会影响结果？ 具体方法如下： 1.采取8叶（或多达3个完整的小植物 - 见注2）;迅速浸入含有0.01％BHT（丁基化羟基甲苯，例如Sigma B1378）的3ml 75℃（预热的）异丙醇中15分钟。使用一个50毫升（25 x 150毫米）玻璃管与特氟隆衬里螺帽。注释1：取样后立即提取植物，并预热异丙醇是非常重要的。植物具有非常活跃的磷脂酶D，其在受伤时被激活;不能将取样的组织迅速置于热的异丙醇中将导致产生磷脂酸。注2：为了进行分析，只需要一小部分拟南芥叶片。使用更多的组织减少了样本之间的差异。建议干重5至30毫克，按照步骤7测定。 2.加入1.5毫升氯仿和0.6毫升水，涡旋;然后在室温下摇动（摇动培养箱）1小时。转移（长玻璃巴斯德吸液管）脂质提取物到带有特氟龙衬里螺帽的玻璃管中。 3.加入0.01％BHT的4ml氯仿/甲醇（2：1）摇30分钟。对所有样本重复提取过程，直到每个样本的叶子变成白色，但是通常每个样本被提取相同的次数。 （在每个样品中使用一个移液器进行全部提取，留在提取剩余物质的提取物中）。在稍后的提取中离开超过30分钟是可以的。通常你需要5次左右的提取，包括异丙醇。 4.加入1 ml 1M KCl到合并的提取液中，涡旋振荡，离心，弃去上层相。 5.加2 ml水，涡旋振荡，离心，弃去上层相。 6.用氮气填充管子，存放在冰箱里;并运往KLRC干冰分析实验室。或者，如果您需要运送样品，则蒸发溶剂，将管充满氮气，然后装运干冰。您可能希望考虑将样品转移到带有聚四氟乙烯衬里的2毫升小瓶，以便运输。 7.在105℃烘箱中干燥提取的叶子过夜;称重“干”重量。 注意：这个程序可以适用于其他植物组织，包括根，茎，花和长角果 |
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