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连接转化总失败 已有1人参与
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目的片段用含有酶切位点的全长引物pcr之后酶切，载体也用相同的酶进行酶切，连接然后转化，但是转化一直不成功，不知道问题出在哪里，感受态一定是好使的，目的片段和载体的酶切回收产物也比较亮，就是连不上，连接酶用的solution1，求帮助指点一下问题出在哪里，跪谢！ 发自小木虫IOS客户端 |
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新虫 (小有名气)
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2楼2017-10-19 11:07:20
damaoouba
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3楼2017-10-19 11:26:23
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你insert和vector 都切的没问题的话。你链接条件试一下，先16度（泡在水里）连1h，然后室温3h，然后转化，转化冰域1h，复苏一个半小时，然后全部涂板。 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-10-19 11:41:39
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不然换一下solution 1，虽solution 1号称室温1h搞定，但是我连接都会连很久，毕竟一开始的低温有利于DNA环化，后面室温利于酶活性的链接。这样板上的克隆也明显多一些。 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-10-19 11:44:05
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6楼2018-09-11 16:39:54