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教洋文

新虫 (初入文坛)

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专业: 生物物理、生物化学与分子

[交流] superdex75纯化蛋白低盐反而出峰，高盐不出峰已有7人参与

大家好，请教一个问题，我在纯化抗体片段，约50KD，杂蛋白120KD，用S75pg这个柱子。现在有一个很奇怪的现象，用20mM Tris+100mM Nacl pH7.42CV都不出峰，在1cv时已出盐峰。换水冲1CV后反而在电导下降时，即缓冲液约换成纯水时出了目的蛋白峰。理论上加了盐应该利于蛋白下来的，为什么现在反而是低盐蛋白下来了。大家对此现象有什么好解释吗？

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1楼 2017-10-14 16:13:37

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教洋文

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引用回帖:

14楼: Originally posted by hc-material at 2018-04-24 17:03:47
建议你不管用水还是用缓冲液，都先跑10个cv看看情况，然后在分析，一个过程中换缓冲液很难分析。缓冲液浓度很低，应该不会有疏水作用。从平衡到结束，不管啥让他整个过程完成，中间换缓冲液，结果不好分析。对了柱 ...

柱子是GE10/6000的预装柱，120ml，60cm高。其实我还是不太理解您的意思，分子筛进去的东西难道不应该在1cv出来吗？除非有什么作用力抓住了蛋白或者蛋白聚集堵住了让它在柱子里面出不来，再加上盐分子量那么小都走出来了，蛋白如果正常不是早就改出来了吗？

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