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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr问题
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柠檬树123456

新虫 (初入文坛)
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pcr问题
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新手。左边的是白光反射，右边是紫外？为什么会这样？目的条带大概是800左右，应该处于maker一半位置。急急急！！！求解答，应该如何解决，是引物浓度太高了那？

pcr问题


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1楼 2017-10-13 23:27:14
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当X≠Y时

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物有点多，建议做个梯度退火

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6楼2017-10-13 23:31:22
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D124-91

新虫 (著名写手)
居然没看明白

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8楼2017-10-14 00:40:29
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柠檬树123456

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 当X≠Y时 at 2017-10-13 23:31:22
引物有点多，建议做个梯度退火

之前做，这个引物浓度都是可以啊。这样情况是表明是有提出来的吧？这会不会与我DNA提取后放负二十度冰箱保存了十几天再pcr有关？

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9楼2017-10-14 07:50:16
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柠檬树123456

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 当X≠Y时 at 2017-10-13 23:31:22
引物有点多，建议做个梯度退火

那这是完全失败了吗？不能送出去测序了？

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10楼2017-10-14 07:51:28
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柠檬树123456

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by D124-91 at 2017-10-14 00:40:29
居然没看明白

pcr后的电泳结果超出了maker，应该在maker范围内的，不知道为什么，算完全失败吗？不能送出去测序？

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11楼2017-10-14 07:53:52
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柠檬树123456

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 柠檬树123456 at 2017-10-13 23:27:14
新手。左边的是白光反射，右边是紫外？为什么会这样？目的条带大概是800左右，应该处于maker一半位置。急急急！！！求解答，应该如何解决，是引物浓度太高了那？

...

大神们求解答

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12楼2017-10-14 07:55:45
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当X≠Y时

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 柠檬树123456 at 2017-10-14 07:51:28
那这是完全失败了吗？不能送出去测序了？
...

貌似不能送测了，没有合适条带

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13楼2017-10-14 08:07:51
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D124-91

新虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-15 07:50:22
引用回帖:
11楼: Originally posted by 柠檬树123456 at 2017-10-14 07:53:52
pcr后的电泳结果超出了maker，应该在maker范围内的，不知道为什么，算完全失败吗？不能送出去测序？
...

看marker的话，感觉条带大小有问题。以前同样的条件做过PCR吧？产物和marker加入的染料一样多吗？建议重跑电泳，不对的话重新PCR。。

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14楼2017-10-14 10:32:57
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ken19860823

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-15 07:50:44
没看懂的把手机倒过来看，简单来说就是pcr没扩增出来，至于原因，酶，引物或者模板都有可能。做几个control应该就可以找出原因，祝好。

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15楼2017-10-14 12:30:35
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柠檬树123456

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by D124-91 at 2017-10-14 10:32:57
看marker的话，感觉条带大小有问题。以前同样的条件做过PCR吧？产物和marker加入的染料一样多吗？建议重跑电泳，不对的话重新PCR。。
...

对的，以前就是以这个条件做的pcr，这会不会与我是把提取DNA放在了负二十度冰箱保存，再拿出来有关呢？

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16楼2017-10-14 14:56:26
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D124-91

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by 柠檬树123456 at 2017-10-14 14:56:26
对的，以前就是以这个条件做的pcr，这会不会与我是把提取DNA放在了负二十度冰箱保存，再拿出来有关呢？
...

应该没什么关系，放负二十度几天应该没事

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17楼2017-10-14 18:29:17
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seuwater2楼
2017-10-13 23:27   回复  
柠檬树123456(金币+1): 谢谢参与
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17840822603楼
2017-10-13 23:28   回复  
柠檬树123456(金币+1): 谢谢参与
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当X≠Y时4楼
2017-10-13 23:28   回复  
柠檬树123456(金币+1): 谢谢参与
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来啊，学习5楼
2017-10-13 23:29   回复  
柠檬树123456(金币+1): 谢谢参与
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科院大学7楼
2017-10-13 23:32   回复  
柠檬树123456(金币+1): 谢谢参与
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