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新虫 (初入文坛)

[求助] PCR 已有1人参与

我想问一下,做了好多次pcr,电泳检测都没有目的条带,可能是什么原因造成的啊?

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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
无PCR条带的原因有:

1、摸板问题--------提的DNA里面有抑制剂,DNA提取的量太少,含有有机溶剂和蛋白,乙醇有残留等等都会影响反应。
2、Buffer 问题------有的Buffer只能和指定的酶使用,建议用配套的Buffer。
3、引物问题-------引物设计不当,或者由于反复冻融是引物降解。
4、反应条件问题-----反应条件设置不当。

几点建议:
1.你的DNA提的好像不是很好,有降解;但是你扩的片段不是很大,应该问题不大.
2.DNA不是很纯,可以用0.1NaAC+2.5倍体积乙醇沉淀,70%乙醇洗涤。
3.模板太多,可以适当稀释一下,稀释到DNA浓度1-5ng/ul,取1ul作模板(25ul体系)。
及时行乐,人生不留遗憾!
2楼2017-10-06 15:49:28
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