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sod，pod测定是遇到的问题 已有2人参与
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在测定sod的过程中，由于第一批用试剂盒测定的数据不好，只能重新测了，其中2个梯度的材料总共只剩下0.2g叶片材料保存于-80，其他3批材料还有还有0.6g，所以只能按比例减少用量来测定，一共还要测定sod，pod，cat，可溶性糖，Pro，叶绿素含量，mda，任务多，材料少，现在正在探索用0.05g材料去实验，有没有大神懂用的材料少可不可以测定出结果来。 现在的主要问题是我的磷酸缓冲液是0.05mol，ph=7.8的，研磨完液体就会变成红棕色，这样的酶液还能不能用是不是已经失活了还能不能测定？而且很快就会变色，会不会是因为室温太高了造成的？现在由于材料有限，只能讲上清液稀释才够用，稀释之后影响测定结果吗，还是直接用0.05g材料加入5ml缓冲液测定呢？还有就是在4000lx的光下反应8分钟时A0=0 8,按照实验说明就应该停止反应了，可是其他测定管还没有变色，看不出有没有大道50%的抑制率，不明白50%抑制率是一个什么标准。求大神指点，问题有点多 发自小木虫Android客户端 |
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甜筒D(晋鹏代发): 金币+2, 鼓励回帖交流~欢迎常来农林版交流经验~ 2017-09-30 19:28:03
甜筒D(晋鹏代发): 金币+2, 鼓励回帖交流~欢迎常来农林版交流经验~ 2017-09-30 19:28:03
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看楼主的资料应该也是农学同行，我们之前做小麦的时候 7.0和7.8的都用过， 差别不大。不过后来逐步自己改良了一下，用7.8缓冲液，加适量EDTA或EDTA二钠盐，完后加适量PVP。仅供参考吧 发自小木虫Android客户端 |
6楼2017-09-28 22:02:25
晋鹏: 鼓励回帖交流~ 2018-03-23 20:29:56
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最近在做实验 然后用紫外法测植物CAT过氧化氢酶 植物叶子上学期摘的 然后零下八十摄氏度保存了 这个学期来测的 我们用的是0.15g叶子 研磨 定容10ml 然后离心 取上清液0.1ml 然后加0.1ml 2%的H2O2和2ml磷酸缓冲液 但是测的过程那个变化值都不是降的 就一直升 是因为酶失活 还是因为用的样品量太小 还是因为H2O2的用量有问题啊 有大神知道吗 发自小木虫IOS客户端 |
8楼2018-03-23 20:03:08
qiushi0312
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研磨完的颜色要看你具体的材料是啥。另外根据楼主的描述，建议提取液中添加适量PVP防止组织中的酚氧化产生别的颜色干扰结果。另外，材料一般可以成比例减少用量，但最好保证材料质量和提取液的比例不变，后面公式计算活性时再乘减少的倍数即可。祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-09-28 20:31:29
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4楼2017-09-28 21:25:23
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