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甜筒D

新虫 (初入文坛)

[求助] sod,pod测定是遇到的问题已有2人参与

在测定sod的过程中,由于第一批用试剂盒测定的数据不好,只能重新测了,其中2个梯度的材料总共只剩下0.2g叶片材料保存于-80,其他3批材料还有还有0.6g,所以只能按比例减少用量来测定,一共还要测定sod,pod,cat,可溶性糖,Pro,叶绿素含量,mda,任务多,材料少,现在正在探索用0.05g材料去实验,有没有大神懂用的材料少可不可以测定出结果来。
现在的主要问题是我的磷酸缓冲液是0.05mol,ph=7.8的,研磨完液体就会变成红棕色,这样的酶液还能不能用是不是已经失活了还能不能测定?而且很快就会变色,会不会是因为室温太高了造成的?现在由于材料有限,只能讲上清液稀释才够用,稀释之后影响测定结果吗,还是直接用0.05g材料加入5ml缓冲液测定呢?还有就是在4000lx的光下反应8分钟时A0=0 8,按照实验说明就应该停止反应了,可是其他测定管还没有变色,看不出有没有大道50%的抑制率,不明白50%抑制率是一个什么标准。求大神指点,问题有点多

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氚核

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
甜筒D(晋鹏代发): 金币+2, 鼓励回帖交流~欢迎常来农林版交流经验~ 2017-09-30 19:28:03
引用回帖:
4楼: Originally posted by 甜筒D at 2017-09-28 21:25:23
之前生理盐和ph7.0的缓冲液提取是就是绿色的,也不会很快变色,是不是跟这个7.8的缓冲液有关系啊
...

看楼主的资料应该也是农学同行,我们之前做小麦的时候  7.0和7.8的都用过, 差别不大。不过后来逐步自己改良了一下,用7.8缓冲液,加适量EDTA或EDTA二钠盐,完后加适量PVP。仅供参考吧

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6楼2017-09-28 22:02:25
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ZIJI

新虫 (初入文坛)

晋鹏: 鼓励回帖交流~ 2018-03-23 20:29:56
最近在做实验 然后用紫外法测植物CAT过氧化氢酶 植物叶子上学期摘的 然后零下八十摄氏度保存了   这个学期来测的   我们用的是0.15g叶子 研磨 定容10ml 然后离心 取上清液0.1ml 然后加0.1ml 2%的H2O2和2ml磷酸缓冲液 但是测的过程那个变化值都不是降的 就一直升  是因为酶失活 还是因为用的样品量太小 还是因为H2O2的用量有问题啊 有大神知道吗

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8楼2018-03-23 20:03:08
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qiushi0312

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
甜筒D(晋鹏代发): 金币+1, 鼓励回帖交流~欢迎常来农林版交流经验~ 2017-09-30 19:28:10
加10%PVP结果还是不错的。祝实验成功
7楼2017-09-30 09:49:15
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普通回帖

氚核

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
甜筒D(晋鹏代发): 金币+2, 鼓励回帖交流~欢迎常来农林版交流经验~ 2017-09-28 21:26:03
研磨完的颜色要看你具体的材料是啥。另外根据楼主的描述,建议提取液中添加适量PVP防止组织中的酚氧化产生别的颜色干扰结果。另外,材料一般可以成比例减少用量,但最好保证材料质量和提取液的比例不变,后面公式计算活性时再乘减少的倍数即可。祝好!

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2楼2017-09-28 20:31:29
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甜筒D

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 氚核 at 2017-09-28 20:31:29
研磨完的颜色要看你具体的材料是啥。另外根据楼主的描述,建议提取液中添加适量PVP防止组织中的酚氧化产生别的颜色干扰结果。另外,材料一般可以成比例减少用量,但最好保证材料质量和提取液的比例不变,后面公式计 ...

2楼说的有道理,我去试一试,按比例磨样 提上清液,再稀释去测,测完计算时再乘回来?是这个意思吧?

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3楼2017-09-28 21:15:35
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甜筒D

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 氚核 at 2017-09-28 20:31:29
研磨完的颜色要看你具体的材料是啥。另外根据楼主的描述,建议提取液中添加适量PVP防止组织中的酚氧化产生别的颜色干扰结果。另外,材料一般可以成比例减少用量,但最好保证材料质量和提取液的比例不变,后面公式计 ...

之前生理盐和ph7.0的缓冲液提取是就是绿色的,也不会很快变色,是不是跟这个7.8的缓冲液有关系啊

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4楼2017-09-28 21:25:23
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氚核

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 甜筒D at 2017-09-28 21:15:35
2楼说的有道理,我去试一试,按比例磨样 提上清液,再稀释去测,测完计算时再乘回来?是这个意思吧?
...

考虑到你样品少并且测的指标多,可以考虑少取材料,比如说文献是0.5g,实际可以用0.1g。提取液体积不变的话,不就相当于稀释5倍嘛

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5楼2017-09-28 21:58:53
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秦国礼

新虫 (小有名气)

测定时酶液只加了一半,数据还可以用吗

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9楼2018-12-04 16:42:55
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王美猪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ZIJI at 2018-03-23 20:03:08
最近在做实验 然后用紫外法测植物CAT过氧化氢酶 植物叶子上学期摘的 然后零下八十摄氏度保存了   这个学期来测的   我们用的是0.15g叶子 研磨 定容10ml 然后离心 取上清液0.1ml 然后加0.1ml 2%的H2O2和2ml磷酸缓冲液 ...

想问您的问题解决了嘛

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笨笨傻傻过好每一天
10楼2019-01-28 19:03:15
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