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xiaomdj

金虫 (正式写手)

[求助] 用thrombin去掉GST标签后蛋白沉淀

我的蛋白用thrombin去掉GST标签后全部沉淀了,各位高手有什么建议?      

我的蛋白预测的等电点在9.6,我用的缓冲液是Tris或者磷酸盐, PH=6,7,8,9都试了,盐的浓度也从100mM-500mM都试了,加了DTT。请我我怎么判断我的蛋白是什么原因引起的沉淀,需要做些什么实验验证。
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逆天寻梦

新虫 (初入文坛)

遇到相同的问题可以商量一下,请问解决了吗?
4楼2018-07-30 21:50:11
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sss2172014

木虫 (小有名气)

gst标签有助溶效果,去掉会沉,说明蛋白溶解性不好。进而推断有大量的疏水区或者电荷区暴露,疏水可以试试加1%的sds,电荷就是调整盐浓度和ph,温度也是一个重要的因素。蛋白是可溶蛋白还是膜蛋白?多少温度切的?

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-09-27 15:58:39
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HHHH0099

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sss2172014 at 2017-09-27 15:58:39
gst标签有助溶效果,去掉会沉,说明蛋白溶解性不好。进而推断有大量的疏水区或者电荷区暴露,疏水可以试试加1%的sds,电荷就是调整盐浓度和ph,温度也是一个重要的因素。蛋白是可溶蛋白还是膜蛋白?多少温度切的?
...

请问你测定过包涵体沉淀的蛋白浓度么?最近在研究这个不知道该怎么测,求指导
3楼2017-10-25 20:31:46
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