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用thrombin去掉GST标签后蛋白沉淀
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我的蛋白用thrombin去掉GST标签后全部沉淀了，各位高手有什么建议？ 我的蛋白预测的等电点在9.6，我用的缓冲液是Tris或者磷酸盐， PH=6，7，8，9都试了，盐的浓度也从100mM-500mM都试了，加了DTT。请我我怎么判断我的蛋白是什么原因引起的沉淀，需要做些什么实验验证。 |
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4楼2018-07-30 21:50:11
sss2172014
木虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 3437.6
- 红花: 3
- 帖子: 126
- 在线: 44.9小时
- 虫号: 3248030
- 注册: 2014-06-01
- 专业: 生物大分子结构与功能
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gst标签有助溶效果，去掉会沉，说明蛋白溶解性不好。进而推断有大量的疏水区或者电荷区暴露，疏水可以试试加1%的sds，电荷就是调整盐浓度和ph，温度也是一个重要的因素。蛋白是可溶蛋白还是膜蛋白？多少温度切的？ 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-09-27 15:58:39
3楼2017-10-25 20:31:46
5
