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xiaomdj

金虫 (正式写手)

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[求助] 用thrombin去掉GST标签后蛋白沉淀

我的蛋白用thrombin去掉GST标签后全部沉淀了，各位高手有什么建议？

我的蛋白预测的等电点在9.6，我用的缓冲液是Tris或者磷酸盐， PH=6，7，8，9都试了，盐的浓度也从100mM-500mM都试了，加了DTT。请我我怎么判断我的蛋白是什么原因引起的沉淀，需要做些什么实验验证。

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1楼 2017-09-27 09:17:53

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HHHH0099

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by sss2172014 at 2017-09-27 15:58:39
gst标签有助溶效果，去掉会沉，说明蛋白溶解性不好。进而推断有大量的疏水区或者电荷区暴露，疏水可以试试加1%的sds，电荷就是调整盐浓度和ph，温度也是一个重要的因素。蛋白是可溶蛋白还是膜蛋白？多少温度切的？
...

请问你测定过包涵体沉淀的蛋白浓度么？最近在研究这个不知道该怎么测，求指导