| 查看: 1201 | 回复: 0 | |||
[交流]
细胞凋亡诱导
|
|
【实验方法与步骤】 （1）细胞凋亡的诱导：HeLa细胞常规传代培养至对数生长期(见细胞传代培养）。实验组细胞加入顺铂溶液（生理盐水配置）至终浓度为20μmo1/L,37℃，5% CO2条件下继续培养。空白实验对照加入等体积的生理盐水，同样条件继续培养。24h后进行染色及形态学观察。 （2）胰酶消化细胞，将培养基上清及消化下来的细胞一同转入离心管中600~800r/min离心10min。 （3）吸去上清，用1mL PBS重悬细胞沉淀，并转入1.5mL微量离心管中，600~800r/min离心10min。 （4）吸去上清，用500μL PBS重量细胞沉淀，取178μL转入0.5mL的微量离心管中，加入PI 20μL（终浓度100μg/mL），Hoechest 33342 2μL（终浓度10μg/mL），混匀，37℃温箱中避光标记15min。 （5）600~800r/min离心10min，弃上清，加50μL PBS重悬细胞。 （6）分别从实验组及对照组中取10μL细胞悬液滴于载玻片上，盖上盖玻片。 （7）荧光显微镜20倍物镜在紫外光激发下观察，可观察到凋亡细胞核形态发生明显的改变，出现染色质凝集及边缘化。 【注意事项】 （1）诱导细胞凋亡后收集细胞时，注意要同时收集细胞培养基上清液。 （2）悬浮细胞时动作要轻柔，避免损伤细胞。 （3）在实验中可同时设计坏死细胞的对照，例如，取正常细胞经低渗后进行染色观察。 |
回复此楼» 猜你喜欢
教师节聊点实在的：很多老师的专利正在悄悄失效
已经有22人回复
-
第一次独立答复专利审查意见，才发现这活跟毕业答辩是一个套路
已经有24人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有120人回复
-
使用QE质谱仪检测杂质含量
已经有0人回复
-
帮学院整理搁置专利清单时发现一半快到年费期，聊聊几条盘活的路子
已经有19人回复
-
师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？
已经有8人回复
-
实验室折腾了三年的自制设备要不要申请专利？跟导师争了一晚上没吵明白
已经有11人回复
-
入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍
已经有6人回复
-
搬家整理出五年前的失败实验记录，导师说这些"废数据"先别扔
已经有3人回复
-
做AI的同门问我他那个预测模型能不能申请专利，我查完发现答案有点绕
已经有0人回复