| 查看: 1208 | 回复: 3 | |||
落日余晖34木虫 (正式写手)
|
[交流]
脱靶还是未发生剪切？ 已有3人参与
|
|
楼主采用crispr/cas9双质粒系统对克雷伯氏菌进行敲除，这两个质粒均已证明可以在大肠mg1655中进行基因敲除，但是我设计好4个sgRNA，进行敲除时发现，我成功将两个质粒都转入了，而板上全是假阳性菌落，猜测原因可能是cas9未成功表达，其启动子为本源启动子，而sgrna的启动子是pj23119，是一种合成的细菌组成型启动子，另外，关于脱靶我很困惑，脱靶应该是指发生了非特异性剪切，而我转完含有sgrna的质粒之后，后培养菌体取的很少涂板也能糊板，说明应该是没有发生剪切，因为剪切了的话，一部分没来的及修复的细胞应该是致死的。还望各位小伙伴给分析一下，为什么会有这么高的假阳性。 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有137人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
lusandanooo
银虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 132.1
- 散金: 3
- 红花: 5
- 帖子: 260
- 在线: 96.2小时
- 虫号: 4149251
- 注册: 2015-10-16
- 性别: GG
- 专业: 林产化学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
我遇到了跟你一样的问题，敲的是革兰氏阴性菌，非大肠，已经试了8个sgRNA，每次转化都能长几百个单克隆，但全是假阳性…… 发自小木虫Android客户端 |
2楼2018-01-05 22:24:13
3楼2018-01-16 14:57:22
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2019-04-17 11:06:26
50