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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求解释原因(╥ ╥`)?
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久久丫②

新虫 (小有名气)

[求助] 求解释原因(╥ ╥`)?

目的基因200多bp,载体是荧光报告载体，扩增纯化浓度都正常，胶回收时条带很亮，可是回收后测浓度很低，峰值在230附近特别奇怪。求解释原因

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1楼 2017-09-21 00:08:25
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久久丫②

新虫 (小有名气)
这样连接也连不上啊

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2楼2017-09-21 00:08:59
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yfuxnr455

木虫 (著名写手)
初来乍到，请多多关照。。。
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3楼2017-09-21 02:17:59
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yfuxnr455

木虫 (著名写手)
初来乍到，请多多关照。。。
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4楼2017-09-21 02:18:30
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酷莱博

新虫 (小有名气)
胶回收试剂盒不好。200bp的片段一般没处理的吸附柱回收率不是

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5楼2017-09-21 06:47:19
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酷莱博

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-21 07:47:26
回收率不是很高，溶胶液上柱的时候添加10-20%的异丙醇再上柱

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6楼2017-09-21 06:48:21
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久久丫②

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 酷莱博 at 2017-09-21 06:47:19
胶回收试剂盒不好。200bp的片段一般没处理的吸附柱回收率不是

加了一倍体积的异丙醇了，试剂盒都在用，别人都没什么问题的

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7楼2017-09-21 07:46:29
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不吃M的鱼

金虫 (小有名气)
200多的回收效率低，都扩增几管一块回收就好了。我们之前扩120bp的片段，都是扩了8管回收才200ng/ul。

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8楼2017-09-21 09:29:26
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久久丫②

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 不吃M的鱼 at 2017-09-21 09:29:26
200多的回收效率低，都扩增几管一块回收就好了。我们之前扩120bp的片段，都是扩了8管回收才200ng/ul。

可我的载体回收率也很低就感觉很不正常了。而且峰值也在230,都快被导师说的怀疑人生了。

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9楼2017-09-21 09:38:00
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不吃M的鱼

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 久久丫② at 2017-09-21 09:38:00
可我的载体回收率也很低就感觉很不正常了。而且峰值也在230,都快被导师说的怀疑人生了。
...

那仪器有没有问题呢？重新校零看看，还有比色皿换个看看？或者把回收的片段再跑个电泳，估算浓度连接就好。你这个片段不大的2片段连接很好连，我们一般连都不测浓度的。

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10楼2017-09-21 09:48:31
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