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luck12345678

新虫 (小有名气)

[求助] 连接超表达载体后，转化大肠杆菌总是没有阳性克隆怎么回事？ 已有1人参与

大哥大姐们，我最近做了两次酶切连接转化大肠杆菌了，挑菌时总是没有阳性克隆，，，，酶切也切出来了，连接也出来了，可是就是转化后没有阳性克隆怎么回事，求帮助求指点。。。。。图分别是酶切后，连接后，跟转化后菌液pcr

连接超表达载体后，转化大肠杆菌总是没有阳性克隆怎么回事？


连接超表达载体后，转化大肠杆菌总是没有阳性克隆怎么回事？-1


连接超表达载体后，转化大肠杆菌总是没有阳性克隆怎么回事？-2


@wizardfan @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-09-20 08:32:59
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涯天一方

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mlxmiao at 2017-09-20 14:19:34
那就是没有连上。载体片段与目的片段加大浓度和时间。还不行，换个方法，如融合
...

您好，我最近也是做过表达，普通连接，转化后第二天不长菌，第三天会长出密密麻麻的小菌，验证后不对。用融合的方法做了，还是出现同样的问题，这是什么问题呢
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9楼2017-09-23 20:13:20
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luck12345678

新虫 (小有名气)


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2楼2017-09-20 08:37:01
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luck12345678

新虫 (小有名气)
连接超表达载体后，转化大肠杆菌总是没有阳性克隆怎么回事？-3

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3楼2017-09-20 08:37:39
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luck12345678

新虫 (小有名气)
专家怎么邀请呢

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4楼2017-09-20 08:37:58
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