[求助] 连接超表达载体后，转化大肠杆菌总是没有阳性克隆怎么回事？已有1人参与

大哥大姐们，我最近做了两次酶切连接转化大肠杆菌了，挑菌时总是没有阳性克隆，，，，酶切也切出来了，连接也出来了，可是就是转化后没有阳性克隆怎么回事，求帮助求指点。。。。。图分别是酶切后，连接后，跟转化后菌液pcr

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1楼 2017-09-20 08:32:59

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引用回帖:

10楼: Originally posted by mlxmiao at 2017-09-23 20:55:48
1.延长融合时间，我一般是40-60分钟。
2.体系可以减半，尽量不加水，多加线性化载体和你的东西。用分光光度计测下，按合适的比例，摩尔比3以上。最好都是胶回收的，这样比较纯。
3.重合碱基增多，20-25，引物估计要 ...

谢谢谢谢，，太感谢了，，谢谢

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