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关于克隆
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用已经确定含有目的片段的菌（经过克隆然后测序正确后扩大培养的菌）进行克隆，提取质粒后，进行PCR扩增，为什么不能扩增出目的片段出来呢？ 发自小木虫Android客户端 |
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你是用的你的特异性的引物做的连接液扩增还是用的通用引物做的扩增？ 如果是特异性的引物做的扩增，可能没有连上，你扩增的是你连接加入的模板的扩增结果。问题在连接 如果是通用引物扩增的，大小还可你的大小对的上。那么你需要核实第二次扩增的时候是用的引物： 1：是基因的特异性引物，扩增失败，那么张的是杂菌，排查平板的问题，是不是长了很久了，是不是抗生素浓度太低。 2：如果是通用引物扩增的，那么可能是pcr mix不耐脏。你师姐能做出来不代表你能做出来。可以做以下尝试，将菌落加入10ul无菌水中震荡混匀，再取1ul模板PCR扩增，能解决PCR扩增的问题。 擎科生物很高兴为您服务。我们在北京，北京南，上海，广州，武汉，杭州，南京，成都，昆明，青岛，重庆，西安，长沙提供免费上面技术支持。 |
11楼2017-09-20 10:26:38
2楼2017-09-20 08:16:58
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我们是加了1μ的模板，总体系是25μ，浓度应该没有问题，因为有个师姐也是这样扩增的。就有结果，我们的不同就在于所用的菌的培养时间不同，我的是以前的，她的是新摇的 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-09-20 09:00:33
4楼2017-09-20 09:10:39