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你好先生121

铁虫 (小有名气)

[求助] 耐药质粒 已有1人参与

有没有人可以讲解一下一个问题，最近对一株多重耐药的大肠杆菌提质粒后，随机用双酶切切质粒，切出来了许多小片段，导师说让我把小片段胶回收后克隆，但是克隆转化后，长出了菌落，摇菌也能浑浊，但是用耐药基因引物扩增却没有条带，不知什么原因，有谁可以讲解啊，谢谢啦。。。。急等
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简简单单
1楼 2017-09-18 23:07:47
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小片段克隆后的产物，你用原来的耐药基因引物来PCR肯定P不出来啊，你想想，目标片段都是小片段，原PCR引物的靶点序列不一定就在你的小片段上呀。要PCR的话需要设计该小片段的引物才行。
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2楼2017-09-19 11:22:12
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你好先生121

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-09-19 11:22:12
小片段克隆后的产物，你用原来的耐药基因引物来PCR肯定P不出来啊，你想想，目标片段都是小片段，原PCR引物的靶点序列不一定就在你的小片段上呀。要PCR的话需要设计该小片段的引物才行。

好的，万分感谢
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简简单单
3楼2017-09-19 16:55:40
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shenglong00

铜虫 (小有名气)
模板被你切成小片段，你的引物没在模板范围内了吧

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仰天大笑出门去，我等岂是蓬蒿人
4楼2017-10-12 15:18:07
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WRU123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-09-19 11:22:12
小片段克隆后的产物，你用原来的耐药基因引物来PCR肯定P不出来啊，你想想，目标片段都是小片段，原PCR引物的靶点序列不一定就在你的小片段上呀。要PCR的话需要设计该小片段的引物才行。

说的是

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5楼2017-11-12 07:18:35
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WRU123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 你好先生121 at 2017-09-18 23:07:47
有没有人可以讲解一下一个问题，最近对一株多重耐药的大肠杆菌提质粒后，随机用双酶切切质粒，切出来了许多小片段，导师说让我把小片段胶回收后克隆，但是克隆转化后，长出了菌落，摇菌也能浑浊，但是用耐药基因引物 ...

瓜娃子，跑什么PCR？直接送出去测序不就完事了

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6楼2017-11-12 07:19:13
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