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血浆游离DNA提取试剂盒
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【产品名称】 血浆游离DNA提取试剂盒 货号：KR008K/50次 【产品简介】 本试剂盒可快速、高效地提取游离DNA（cfDNA），适用样本包括含有EDTA抗凝剂的人类及哺乳动物血浆、血清和唾液等。 试剂盒中的离心吸附柱采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA， 可最大限度去除杂质蛋白及其他有机化合物。提取的DNA纯度高，质量稳定可靠，可直接应用于PCR、Q-PCR、测序等下游实验。 【产品内容】 产品组成 规格 说明 保存条件 裂解液 CBL 55 mL 室温 缓冲液 DL 60 mL 使用前加入40mL异丙醇 洗涤液CWB1 12 mL 使用前加入18mL无水乙醇 洗涤液WB2 8 mL 使用前加入24 mL无水乙醇 洗脱液 10mM Tris-HCl pH8.0 6 mL 50% 甘油 10 mL DNA吸附柱 50支 收集管2-mL 50支 无核酸酶污染离心管 1.5-mL 50支 Proteinase K 2瓶 每瓶在使用前加入4mL 50% 甘油，于-20℃保存 4℃ *已充分考虑到每次吸取试剂时的损耗，试剂有效期为12个月。 【使用前注意事项】 1. 试剂盒中Proteinase K为冻干粉，于4℃保存；每瓶使用前加入4mL 50%甘油后于-20℃保存。 2. 第一次使用前应在缓冲液DL中加入40 mL异丙醇。 3. 第一次使用前应在洗涤液CWB1中加入18 mL无水乙醇。 4. 第一次使用前应在洗涤液WB2中加入24 mL无水乙醇。 5. 裂解液CBL在室温较低时可能出现结晶，可于37℃水浴溶解。 【操作步骤】 1. 取1mL血浆加入到10mL（或15mL）离心管中（自备），加入150 μL Proteinase K和1mL 裂解液CBL，涡旋震荡混匀。 注意：此步骤必须确保混合均匀。 2. 60℃温浴40 min。 3. 在离心管中加入1.8mL 缓冲液DL，涡旋震荡混匀。 注意：初次使用前需向缓冲液DL瓶中加入40 mL的异丙醇，并充分震荡混匀。 4. 将DNA吸附柱置于2-mL收集管中，将上述溶液全部转移到DNA吸附柱中（每次850μL），13,000 rpm离心1 min，弃滤液。 注意：DNA吸附柱的最大容量是850 μL，请勿超出最大容量。总共需离心5次，1-4次可以在离心机转速达到10,000rpm后停止（约离心40s），最后一次离心时务必于13,000 rpm离心1 min。有条件的实验室可使用抽滤法过柱（需自备）。 5. 向DNA吸附柱中加入洗涤液CWB1 500 μL，13,000 rpm离心1 min，弃滤液。 注意：初次使用前需向洗涤液CWB1瓶中加入18 mL的无水乙醇，并充分震荡混匀。 6. 将DNA吸附柱重新放回2 mL收集管中，加入500 μL洗涤液WB2，13,000 rpm离心1 min，弃滤液。 注意：初次使用前需向洗涤液WB2瓶中加入24 mL的无水乙醇，并充分震荡混匀。 7. 将DNA吸附柱置于新的1.5-mL无核酸酶污染的离心管中（本试剂盒提供），于室温静置或超净工作台风干3-5 min，以彻底挥发残余的乙醇。 注意：残留的乙醇可能会影响后续的PCR等实验。 8. 向吸附柱柱膜中央上方小心加入20-30 μL 洗脱液10mM Tris-HCl pH8.0 （此步骤请谨慎操作，枪头请勿接触柱膜)，室温静置1 min，13,000 rpm 离心1 min。洗脱液即为DNA溶液。 注意：最小洗脱体积为10μL；根据后续实验需求，此步骤也可以用无核酸酶污染的纯水洗脱；洗脱液经65℃温浴后可提高洗脱效率。 |
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2017-09-18 11:52:18, 222.49 K
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