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杜一无二

银虫 (小有名气)


[资源] 血浆游离DNA提取试剂盒

【产品名称】
血浆游离DNA提取试剂盒
货号:KR008K/50次

【产品简介】
本试剂盒可快速、高效地提取游离DNA(cfDNA),适用样本包括含有EDTA抗凝剂的人类及哺乳动物血浆、血清和唾液等。
试剂盒中的离心吸附柱采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA, 可最大限度去除杂质蛋白及其他有机化合物。提取的DNA纯度高,质量稳定可靠,可直接应用于PCR、Q-PCR、测序等下游实验。

【产品内容】
产品组成        规格        说明        保存条件
裂解液 CBL        55 mL                室温
缓冲液 DL        60 mL        使用前加入40mL异丙醇       
洗涤液CWB1        12  mL        使用前加入18mL无水乙醇       
洗涤液WB2        8 mL        使用前加入24 mL无水乙醇       
洗脱液 10mM Tris-HCl  pH8.0        6 mL               
50% 甘油        10 mL               
DNA吸附柱        50支               
收集管2-mL        50支               
无核酸酶污染离心管
1.5-mL          50支               
Proteinase K         2瓶        每瓶在使用前加入4mL 50% 甘油,于-20℃保存        4℃
                       
*已充分考虑到每次吸取试剂时的损耗,试剂有效期为12个月。

【使用前注意事项】
1.        试剂盒中Proteinase K为冻干粉,于4℃保存;每瓶使用前加入4mL 50%甘油后于-20℃保存。
2.        第一次使用前应在缓冲液DL中加入40 mL异丙醇。
3.        第一次使用前应在洗涤液CWB1中加入18 mL无水乙醇。
4.        第一次使用前应在洗涤液WB2中加入24 mL无水乙醇。
5.        裂解液CBL在室温较低时可能出现结晶,可于37℃水浴溶解。












【操作步骤】
1.        取1mL血浆加入到10mL(或15mL)离心管中(自备),加入150 μL Proteinase K和1mL 裂解液CBL,涡旋震荡混匀。
注意:此步骤必须确保混合均匀。
2.        60℃温浴40 min。     
3.        在离心管中加入1.8mL 缓冲液DL,涡旋震荡混匀。
注意:初次使用前需向缓冲液DL瓶中加入40 mL的异丙醇,并充分震荡混匀。
4.        将DNA吸附柱置于2-mL收集管中,将上述溶液全部转移到DNA吸附柱中(每次850μL),13,000 rpm离心1 min,弃滤液。
注意:DNA吸附柱的最大容量是850 μL,请勿超出最大容量。总共需离心5次,1-4次可以在离心机转速达到10,000rpm后停止(约离心40s),最后一次离心时务必于13,000 rpm离心1 min。有条件的实验室可使用抽滤法过柱(需自备)。
5.        向DNA吸附柱中加入洗涤液CWB1 500 μL,13,000 rpm离心1 min,弃滤液。
注意:初次使用前需向洗涤液CWB1瓶中加入18 mL的无水乙醇,并充分震荡混匀。
6.        将DNA吸附柱重新放回2 mL收集管中,加入500 μL洗涤液WB2,13,000 rpm离心1 min,弃滤液。
注意:初次使用前需向洗涤液WB2瓶中加入24 mL的无水乙醇,并充分震荡混匀。
7.        将DNA吸附柱置于新的1.5-mL无核酸酶污染的离心管中(本试剂盒提供),于室温静置或超净工作台风干3-5 min,以彻底挥发残余的乙醇。
注意:残留的乙醇可能会影响后续的PCR等实验。
8.        向吸附柱柱膜中央上方小心加入20-30 μL 洗脱液10mM Tris-HCl  pH8.0 (此步骤请谨慎操作,枪头请勿接触柱膜),室温静置1 min,13,000 rpm 离心1 min。洗脱液即为DNA溶液。
注意:最小洗脱体积为10μL;根据后续实验需求,此步骤也可以用无核酸酶污染的纯水洗脱;洗脱液经65℃温浴后可提高洗脱效率。
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