10楼: Originally posted by 不吃M的鱼 at 2017-09-17 18:39:44
你连3个片段怎么只用了2个片段？是一个一个连上去的吗？我们通常是4个酶切位点，切好了一块连的。

11楼: Originally posted by 不吃M的鱼 at 2017-09-17 18:42:22
看错了，你是要把3个片段分别连到同一个载体上，那你载体直接用前面酶切的不是很好吗？你是之前连的空载太多了吗？
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3楼: Originally posted by 感觉要延期哎 at 2017-09-16 23:21:54
最不能理解的是我的目的片段也被切碎了，这是为什么呢，直接过柱回收根本没东西，第三，四道是回收片段图

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10楼: Originally posted by 不吃M的鱼 at 2017-09-17 18:39:44
你连3个片段怎么只用了2个片段？是一个一个连上去的吗？我们通常是4个酶切位点，切好了一块连的。

13楼: Originally posted by 不吃M的鱼 at 2017-09-17 19:54:06
第三第四道是你PCR产物的图？我建议你测个序看看有没有突变，还有就是酶切的片段量是不是太少了，通常要都切上的。不然量不够
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16楼: Originally posted by 黑胡椒牛排 at 2017-09-17 22:02:43
连进去的两个有没有去测序验证过

17楼: Originally posted by ken19860823 at 2017-09-17 22:37:00
你先别纠结你那个中间载体了，你酶切原始载体先连第三个片段。如果没问题再连另外两个片段。先试试，有些片段克隆有方向性的。如果是这个问题，换个载体重新克隆或者换个感受态试试。半年早该各种都试过了，现在来这 ...