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石蜡包埋组织(FFPE)DNA提取试剂盒
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核酸提取试剂 说明书 【产品名称】 石蜡包埋组织(FFPE)DNA提取试剂盒 【包装规格】 型号：FFPE DNA/RNA 货号：KR008C/50次 【预期用途】 用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。其处理后的产物用于临床体外检测使用。 【提取原理】 本试剂盒为从经福尔马林固定石蜡包埋组织（简称FFPE）中提取DNA提供一种高质量、快速、高效的方法。本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 使用本试剂盒提取DNA无需用二甲苯去蜡，操作简单、安全。提取所得的DNA可直接应用于PCR等下游实验。 【主要组成成分】 产品组成 规格 说明 保存条件 除蜡液DB 17 mL 室温 裂解液LB 22 mL 洗涤液WB1 6 mL WB1使用前需按1:4用无水乙醇稀释 洗涤液WB2 28 mL WB2使用前需加入 84 mL无水乙醇 无核酸酶污染 纯水 6 mL 洗涤液WB1稀释瓶 7-mL 1只 50% 甘油 1 mL DNA 吸附柱 50支 收集管2-mL 50支 无核酸酶污染离心管 1.5-mL 50支 Proteinase K 1瓶 使用前加入550 μL 50% 甘油，于-20℃保存 4℃ *已充分考虑到每次吸取试剂时的损耗，试剂有效期为12个月。 【注意事项】 1. 试剂盒中Proteinase K为冻干粉，于4℃保存；使用前加入550 μL 50%甘油后于-20℃保存。 2. 洗涤液WB1在使用前需按1:4用无水乙醇稀释，稀释液可在室温下保存1周。洗涤液WB1稀释瓶供步骤10中稀释WB1使用。 3. 第一次使用前应在洗涤液WB2中加入84 mL无水乙醇。 4. 需自备若干无菌1.5-mL离心管，本试剂盒提供的50支无核酸酶污染的离心管仅用于收集最终提取的DNA溶液。 5. 除温浴步骤外，其余步骤在室温下（15-25℃）操作。 【操作步骤】 1. 将石蜡样品切成5-10 μm厚的切片。 注意：若石蜡块保存于室温，则弃去起始的2~3片切片。切片厚度以 5 μm为佳，适当去除无组织的蜡质可提高提取效率。 2. 将4-8片切片置于1.5-mL离心管中（自备），加入300 μL除蜡液DB。 3. 将离心管置于80 ℃孵育30 min，期间10 min后取出短暂涡旋混匀。 注意：此步骤使组织块与除蜡液充分混匀。当样品量较大时，蜡质溶化后组织块可能粘在离心管壁上，影响提取效率。 4. 于室温冷却2-3 min，加入10 μL的蛋白酶K，涡旋混匀，55 ℃孵育30-60 min至无明显组织块。（视组织量的多少，可酌情减少或增加孵育时间。） 5. 13,000 rpm离心1 min。用枪头小心刺穿液面表层蜡膜，取下层清液至新的1.5-mL离心管中（自备）。 注意：切勿吸到上层浑浊蜡层，否则石蜡可能对DNA纯度有影响。 6. 加入400 μL裂解液LB，颠倒混匀，室温静置10 min。 7. 加入800 μL无水乙醇，涡旋10 sec。 8. 将吸附柱置于2-mL收集管中，再将上述液体转移至吸附柱中，每次加入750 μL，13,000 rpm离心1 min，弃收集管中的滤液。 9. 重复步骤8，直至将所有溶液都经过吸附柱过滤，弃滤液。 10. 向吸附柱中加入已用无水乙醇配制的洗涤液WB1 500 μL，13,000 rpm离心1 min，弃废液。 注意：洗涤液WB1在使用前需按1:4用无水乙醇稀释（例如：若提取10个样本的DNA，则取1 mL洗涤液WB1加入4 mL无水乙醇）。稀释液可在室温下保存1周。 11. 将吸附柱重新放回2-mL收集管中，加入600 μL洗涤液WB2，13,000 rpm离心1 min，弃废液。 注意：初次使用前需向洗涤液WB2中加84 mL的无水乙醇，并振荡混匀。 12. 重复步骤11两次。 13. 将吸附柱重新放回2-mL收集管中，于室温13,000 rpm空柱离心1 min后，置于新的1.5-mL无核酸酶污染的离心管中。开盖室温静置或超净工作台风干5 min，以彻底挥发残余的乙醇。 注意：残留的乙醇可能会影响后续的PCR等实验。 14. 向吸附柱柱膜中央上方小心加入35-100 μL无核酸酶污染的纯水（此步骤请谨慎操作，枪头请勿接触柱膜，纯水经65 ℃温浴后再加入有助于提高洗脱效率），室温静置3-5 min，13,000 rpm离心1 min，洗脱液即为DNA溶液。（建议：为提高DNA浓度，可将洗脱液重新加回柱膜中央，静置3 min后，以13,000 rpm离心1 min洗脱DNA。） 注意：洗脱缓冲液体积不应少于35 μL，体积过小影响回收效率。需长期保存DNA时建议用TE缓冲液（10mM Tris-HCl，1mM EDTA pH8.0）洗脱。 【应用实例】 图一：使用本试剂盒提取弥漫性大B细胞淋巴瘤石蜡包埋组织（5 μm, 6 片）DNA，再以人GAPDH为目的基因进行qPCR；同时，用纯水作为阴性对照。结果显示，DNA的PCR基因扩增良好，而纯水无PCR扩增；表明本试剂盒所提取的DNA质量好，可直接运用于下游PCR等后续实验。 曲线1：样本为弥漫性大B细胞淋巴瘤石蜡包埋组织DNA 曲线2：样本为纯水  22.png |
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2017-09-15 09:07:02, 186.66 K
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