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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

[求助] 用NanoDrop测蛋白酶解以后的多肽含量,结果偏大 已有1人参与

本人最近用胰蛋白酶酶解蛋白,然后用C18脱盐柱对产物脱盐,最后用NanoDrop测定多肽含量,但是测定的结果非常大,已经达到8mg/ml左右,远远大于实际值,实际上按照酶解蛋白量以及溶液体积来计算,应该还不到1mg/ml。所以估计溶液里面应该有其他干扰成分,所以才使得测量值偏大,想请问用NanoDrop测定多肽含量时,什么样的干扰成分会导致测量结果偏大?
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嘻嘻哈哈
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biotpack2

捐助贵宾 (小有名气)


溶液中的去污剂等对测定的准确性有着较大的影响,建议blank最好使用提纯蛋白的溶液。
2楼2017-09-11 12:04:44
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fafu2011915

铜虫 (初入文坛)

你除盐之后是直接测定吗?还是把除盐之后的溶液冻干成粉末之后再测定的?
3楼2017-09-11 14:13:51
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fafu2011915 at 2017-09-11 14:13:51
你除盐之后是直接测定吗?还是把除盐之后的溶液冻干成粉末之后再测定的?

除盐过程中测定的,当时将蛋白酶解溶液过C18脱盐柱,酶解产物按理来说应该都吸附在C18柱上面,流出液里面的酶解产物应该很少,当时为了检验一下脱盐柱的效果,将这些流出液拿去用NanoDrop测了一下多肽含量,但是测量值特别高。
嘻嘻哈哈
4楼2017-09-11 19:41:54
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biotpack2 at 2017-09-11 12:04:44
溶液中的去污剂等对测定的准确性有着较大的影响,建议blank最好使用提纯蛋白的溶液。

当时顺便看了一下A260/A280比值,非常高,都超过1了。
嘻嘻哈哈
5楼2017-09-11 19:43:48
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zhjzhou

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wuhao4850103: 金币+5, ★★★很有帮助 2020-08-20 18:37:49
楼主现在用Nanodrop测蛋白酶解的多肽,有好的参照了吗?比方说OD260/280的值一般在哪个区间,样品纯度是比较高的,怎样评价多肽样品的质量?谢谢!
6楼2020-03-19 10:35:52
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zhjzhou at 2020-03-19 10:35:52
楼主现在用Nanodrop测蛋白酶解的多肽,有好的参照了吗?比方说OD260/280的值一般在哪个区间,样品纯度是比较高的,怎样评价多肽样品的质量?谢谢!

现在测定多肽含量可以使用多肽测定试剂盒,我最近用的是赛默飞厂家的Pierce Quantitative多肽浓度测定试剂盒,
嘻嘻哈哈
7楼2020-08-20 18:40:09
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