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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 用NanoDrop测蛋白酶解以后的多肽含量，结果偏大
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

[求助] 用NanoDrop测蛋白酶解以后的多肽含量，结果偏大 已有1人参与

本人最近用胰蛋白酶酶解蛋白，然后用C18脱盐柱对产物脱盐，最后用NanoDrop测定多肽含量，但是测定的结果非常大，已经达到8mg/ml左右，远远大于实际值，实际上按照酶解蛋白量以及溶液体积来计算，应该还不到1mg/ml。所以估计溶液里面应该有其他干扰成分，所以才使得测量值偏大，想请问用NanoDrop测定多肽含量时，什么样的干扰成分会导致测量结果偏大？
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嘻嘻哈哈
1楼 2017-09-10 19:43:04
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biotpack2

捐助贵宾 (小有名气)
溶液中的去污剂等对测定的准确性有着较大的影响，建议blank最好使用提纯蛋白的溶液。
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2楼2017-09-11 12:04:44
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fafu2011915

铜虫 (初入文坛)
你除盐之后是直接测定吗？还是把除盐之后的溶液冻干成粉末之后再测定的？
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3楼2017-09-11 14:13:51
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fafu2011915 at 2017-09-11 14:13:51
你除盐之后是直接测定吗？还是把除盐之后的溶液冻干成粉末之后再测定的？

除盐过程中测定的，当时将蛋白酶解溶液过C18脱盐柱，酶解产物按理来说应该都吸附在C18柱上面，流出液里面的酶解产物应该很少，当时为了检验一下脱盐柱的效果，将这些流出液拿去用NanoDrop测了一下多肽含量，但是测量值特别高。
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4楼2017-09-11 19:41:54
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biotpack2 at 2017-09-11 12:04:44
溶液中的去污剂等对测定的准确性有着较大的影响，建议blank最好使用提纯蛋白的溶液。

当时顺便看了一下A260/A280比值，非常高，都超过1了。
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5楼2017-09-11 19:43:48
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zhjzhou

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wuhao4850103: 金币+5, ★★★很有帮助 2020-08-20 18:37:49
楼主现在用Nanodrop测蛋白酶解的多肽，有好的参照了吗？比方说OD260/280的值一般在哪个区间，样品纯度是比较高的，怎样评价多肽样品的质量？谢谢！
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6楼2020-03-19 10:35:52
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhjzhou at 2020-03-19 10:35:52
楼主现在用Nanodrop测蛋白酶解的多肽，有好的参照了吗？比方说OD260/280的值一般在哪个区间，样品纯度是比较高的，怎样评价多肽样品的质量？谢谢！

现在测定多肽含量可以使用多肽测定试剂盒，我最近用的是赛默飞厂家的Pierce Quantitative多肽浓度测定试剂盒，
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7楼2020-08-20 18:40:09
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