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zyfskj

新虫 (著名写手)

[求助] 关于反转录与qpcr问题请教

请问,在做相对荧光定量的时候,要调整不同的cDNA模板的浓度还是一开始做反转录的时候把RNA调成同一浓度更有意义?我一开始做反转录的时候,因为没有调RNA 浓度到一致,后面又直接10倍稀释法做了引物的标准曲线,所以,想着测样品的时候把cDNA浓度调成一致。但是,特别麻烦,而且我发现我的cDNA的260/280为1.5左右,不明白为啥会这样,我同学是直接反转录的时候RNA 都用1微克,因为我的RNA 每次提的浓度不超过100,甚至十几的样子,链霉菌的RNA 不好提。所以就没有统一浓度,,。现在做qpcr感觉超级麻烦的不得了,,调整cDNA 可真不好做,,想问一下大家都怎么做的,可以详细指点一下么???

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向我乞求怜悯吧,我会狠狠拒绝的。
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030Selma

金虫 (正式写手)

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-22 07:39:52
调RNA量,因为cDNA浓度你没法调

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2楼2017-09-07 01:36:33
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wu188ming

新虫 (初入文坛)

同意2楼,cDNA你肯定不好调,RNA相对好调一些。
3楼2017-09-08 11:01:47
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龙翔桥

新虫 (小有名气)

相对定量,加个内参试试

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4楼2017-09-22 00:56:24
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