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薰衣草夏枯草

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物生理实验 已有2人参与

测pod酶除了愈创木酚法还有其他方法吗，为什么我测时溶液颜色没有变化，光度值也没变？

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1楼 2017-08-31 09:49:44
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氚核

木虫 (正式写手)
可能的情况 1.酶样品活性低 2.愈创木酚没有完全溶解3.过氧化氢因氧化造成有效浓度降低。话说这个方法很灵敏的，如果没有颜色，就是体系出问题了

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2楼2017-08-31 12:14:43
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安妮十一月

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我图书馆借了好几本书都是这个方法的，自己试着做了一次，我做的植物叶片，用的o.5M PH7.8的磷酸缓冲液研磨提取的酶液，然后就按照实验书上的步骤，反应液用的 50mlPH6.0的PB+28ul愈创木酚+19ul30%H2O2混合的,每次用3ml，最后显色很明显啊，茶褐色，就是测了5min了OD值它还在变大，而且感觉斜率还一样，没有发现最大斜率的那一段呢，还得在做
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3楼2017-08-31 17:55:32
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薰衣草夏枯草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 氚核 at 2017-08-31 12:14:43
可能的情况 1.酶样品活性低 2.愈创木酚没有完全溶解3.过氧化氢因氧化造成有效浓度降低。话说这个方法很灵敏的，如果没有颜色，就是体系出问题了

哦，谢了，还有，如果是酶样活性太低该怎么办，测不了了吗？

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4楼2017-09-01 17:09:43
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薰衣草夏枯草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 安妮十一月 at 2017-08-31 17:55:32
我图书馆借了好几本书都是这个方法的，自己试着做了一次，我做的植物叶片，用的o.5M PH7.8的磷酸缓冲液研磨提取的酶液，然后就按照实验书上的步骤，反应液用的 50mlPH6.0的PB+28ul愈创木酚+19ul30%H2O2混合的,每次用 ...

哦，好的，谢了

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5楼2017-09-01 17:10:16
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氚核

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 薰衣草夏枯草 at 2017-09-01 17:09:43
哦，谢了，还有，如果是酶样活性太低该怎么办，测不了了吗？
...

活性太低可以试试提高加样量，如果还是不行，就考虑是提取步骤出问题了。我们之前都是pH7.8缓冲液加0.186gEDTA定容到1升，内含1％PVP，4℃，12000g离心20min，可供您参考

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6楼2017-09-01 18:45:52
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薰衣草夏枯草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 氚核 at 2017-09-01 18:45:52
活性太低可以试试提高加样量，如果还是不行，就考虑是提取步骤出问题了。我们之前都是pH7.8缓冲液加0.186gEDTA定容到1升，内含1％PVP，4℃，12000g离心20min，可供您参考
...

好的，谢了

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7楼2017-09-02 19:34:41
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