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2017mwl

新虫 (小有名气)

[交流] 表达载体pgex6p1 已有2人参与

目的片段和表达载体pgex6p1酶连过夜18h 菌落和菌液pcr都没有目的条带 请问表达载体有选择性么？是不是得用文献中所述载体？

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1楼 2017-08-27 19:46:59
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-28 06:35:05
蛋白表达情况应该是有选择性的，但载体与目的片段连接应该没有，检查酶切位点，片段浓度，比例，连接体系，连接酶是否正常。

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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
2楼2017-08-27 19:59:25
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2017-08-27 19:59:25
蛋白表达情况应该是有选择性的，但载体与目的片段连接应该没有，检查酶切位点，片段浓度，比例，连接体系，连接酶是否正常。

嗯嗯 质粒是半年前提的质粒 也有可能质粒本身不纯了 我就怕表达载体不适合 因为在文献里没看到用过这个载体 就用实验室现成的这个了

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3楼2017-08-27 20:15:04
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xmcw765

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-28 06:35:45
我用过pgex6p1，应该是没问题的，你可以载体单酶切鉴定一下，还有你目的片段pcr有没有问题，如果都没问题，就改变连接比例，尝试一下

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4楼2017-08-27 20:27:03
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xmcw765 at 2017-08-27 20:27:03
我用过pgex6p1，应该是没问题的，你可以载体单酶切鉴定一下，还有你目的片段pcr有没有问题，如果都没问题，就改变连接比例，尝试一下

载体单酶切后是一条线性的条带么

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5楼2017-08-27 20:44:31
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2017mwl at 2017-08-27 20:44:31
载体单酶切后是一条线性的条带么
...

目的片段pcr没有问题 连接比例10:1

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6楼2017-08-27 20:45:35
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