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如梦如幻

木虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增无条带,一片拖尾,求大神帮忙分析一下! 已有12人参与

各位大神帮我看看,我在做定点突变,用的Q5 高保真的聚合酶,结果扩增条带是一片弥散,我有调整过模板的添加量,引物添加量,提高退火温度,减少循环次数,增加延伸时间,结果还是这个样子,肿么办呢
第一张电泳图,由左到右,退火温度分别为57.3、63.4、67.3
第二张电泳图,由左到右,退火温度分别为69.3、68.0、66.1、63.8

PCR扩增无条带,一片拖尾,求大神帮忙分析一下!
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PCR扩增无条带,一片拖尾,求大神帮忙分析一下!-1
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jerry110

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-02 22:31:37
定点突变扩环引物设计突变点两侧各15bp,GC含量高加1%DMSO,扩环循环18-20即可,个人建议仅供参考,祝好!
9楼2017-08-28 10:51:41
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793534187

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有没考虑过引物有问题呢……你这完全没带形没产物呀……

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-08-23 19:02:15
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用了多少ng 质粒做模版?
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
3楼2017-08-23 23:22:38
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周大神

铜虫 (小有名气)

这个确实不好说,还是像楼上说的从引物出发

发自小木虫IOS客户端
面对阳光,努力生长
4楼2017-08-24 03:05:28
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