24小时热门版块排行榜    

查看: 4515  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

如梦如幻

木虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增无条带,一片拖尾,求大神帮忙分析一下! 已有12人参与

各位大神帮我看看,我在做定点突变,用的Q5 高保真的聚合酶,结果扩增条带是一片弥散,我有调整过模板的添加量,引物添加量,提高退火温度,减少循环次数,增加延伸时间,结果还是这个样子,肿么办呢
第一张电泳图,由左到右,退火温度分别为57.3、63.4、67.3
第二张电泳图,由左到右,退火温度分别为69.3、68.0、66.1、63.8

PCR扩增无条带,一片拖尾,求大神帮忙分析一下!
N35Q.jpg


PCR扩增无条带,一片拖尾,求大神帮忙分析一下!-1
新N35Q.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周大神

铜虫 (小有名气)

这个确实不好说,还是像楼上说的从引物出发

发自小木虫IOS客户端
面对阳光,努力生长
4楼2017-08-24 03:05:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

793534187

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有没考虑过引物有问题呢……你这完全没带形没产物呀……

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-08-23 19:02:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用了多少ng 质粒做模版?
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
3楼2017-08-23 23:22:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

如梦如幻

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 793534187 at 2017-08-23 19:02:15
有没考虑过引物有问题呢……你这完全没带形没产物呀……

我也觉得引物有问题,我序列本身GC含量特别高,定点突变引物设计确实不好弄

发自小木虫Android客户端
5楼2017-08-24 09:34:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见