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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助关于ORF的问题
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百态人生

银虫 (小有名气)

[求助] 求助关于ORF的问题 已有1人参与

大家好，最近实验遇到点小问题：我要重组表达一个蛋白，这个蛋白是由两个亚基构成的，但是编码亚基蛋白的ORF1和ORF2有几个碱基重叠了，我重组的时候需不需要分别PCR?但他们各自都有起始密码子，重组后宿主菌会不会自动识别啊？求助，先谢谢大家了。
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1楼 2017-08-22 22:19:18
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jcstone1027

铁杆木虫 (正式写手)

木虫
我觉得应该没有影响的吧，因为你真正有用的是编码蛋白的序列，就像信号肽一样，这是我个人观点，但没做过蛋白表达。

发自小木虫IOS客户端
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学习，交流
2楼2017-08-22 23:51:05
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bujunyang

木虫 (正式写手)

卓尔不群

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
百态人生: 金币+5, ★★★很有帮助 2017-09-06 14:25:45
重组表达一个蛋白？是要把两个亚基做融合表达吗？
你做的是病毒？无论原核还是真核，两个ORF是不会重叠的。
如果要把病毒的两个蛋白在细菌中表达为融合蛋白的话，你要分别把两个ORF克隆出来，然后连到一块。第一个ORF一定要保留起始密码子，删除终止密码子，第二个ORF保留终止密码子，起始密码子保不保留无关紧要，关键是不要移码。
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来是偶然，去是必然。
3楼2017-08-25 13:10:05
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