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百态人生

银虫 (小有名气)

[求助] 求助关于ORF的问题 已有1人参与

大家好,最近实验遇到点小问题:我要重组表达一个蛋白,这个蛋白是由两个亚基构成的,但是编码亚基蛋白的ORF1和ORF2有几个碱基重叠了,我重组的时候需不需要分别PCR?但他们各自都有起始密码子,重组后宿主菌会不会自动识别啊?求助,先谢谢大家了。
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jcstone1027

铁杆木虫 (正式写手)

木虫

我觉得应该没有影响的吧,因为你真正有用的是编码蛋白的序列,就像信号肽一样,这是我个人观点,但没做过蛋白表达。

发自小木虫IOS客户端
学习,交流
2楼2017-08-22 23:51:05
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bujunyang

木虫 (正式写手)

卓尔不群

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
百态人生: 金币+5, ★★★很有帮助 2017-09-06 14:25:45
重组表达一个蛋白?是要把两个亚基做融合表达吗?
你做的是病毒?无论原核还是真核,两个ORF是不会重叠的。
如果要把病毒的两个蛋白在细菌中表达为融合蛋白的话,你要分别把两个ORF克隆出来,然后连到一块。第一个ORF一定要保留起始密码子,删除终止密码子,第二个ORF保留终止密码子,起始密码子保不保留无关紧要,关键是不要移码。
来是偶然,去是必然。
3楼2017-08-25 13:10:05
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