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多次跨膜、大分子量蛋白western求助！ 已有5人参与
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最近做了两个蛋白，western一直检不到，快哭了，求支招!! 两个蛋白都是70多kD，一个七次跨膜一个十二次跨膜，CMV启动，3HA标签的质粒在293T细胞中转染 之前同样的表达质粒表达细胞做过好几个其它蛋白，分子量偏小的膜蛋白一直没有问题，几秒钟就能曝光得很好 细胞用NP-40裂解液裂解后加loading buffer煮样 多次跨膜蛋白western有没有什么要注意的？是否会影响转膜？ 求大神支招！！ |
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5楼2017-08-22 22:10:57
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-24 07:44:42
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-24 07:44:42
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大分子？70多KD？这个分子量不算大的，如果是多跨膜蛋白，建议loading 后，不要煮样，37度一个小时，离心后直接上样。煮样很容易使膜蛋白沉降！ 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-08-22 06:33:31
chaosyw
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 76 (初中生)
- 金币: 5659.9
- 红花: 18
- 帖子: 717
- 在线: 23.5小时
- 虫号: 2950501
- 注册: 2014-01-28
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2017-08-22 07:23:55
4楼2017-08-22 14:32:43