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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒构建
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阿南hmily

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒构建

PCR产物纯化后DNA和质粒pet-28a分别用hindIII和BamHI酶切，跑胶条带亮，如图（左边的条带是目的基因，右边的条带是酶切后质粒），但是胶回收试剂盒回收后，目的基因只有几ng/ul ，而质粒浓度是0。同样的操作，同时做的PCR产物回收的基因浓度达56ng/ul。
请问怎么回事呢？
好揪心～

质粒构建


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1楼 2017-08-21 20:33:23
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txwznb

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阿南hmily: 金币+5 2017-08-22 08:40:30
本帖内容被屏蔽
2楼2017-08-21 22:28:06
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阿南hmily

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by txwznb at 2017-08-21 22:28:06
可能是溶胶过程有问题，因为后续实验跟pcr产物回收相同。要么再重新回收看看。

谢谢，我再试一遍
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3楼2017-08-22 08:41:28
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jerry110

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阿南hmily: 金币+5 2017-08-22 11:08:27
没有杂带，为啥不直接回收
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-08-22 10:47:56
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阿南hmily

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jerry110 at 2017-08-22 10:47:56
没有杂带，为啥不直接回收

5楼2017-08-22 11:08:19
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ghst110

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 阿南hmily at 2017-08-22 11:08:19
...

确保pET完全切开，直接回收就好，不必切胶。双酶切下的小片段一般很回收到。
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*才随遇长，识以穷精*
6楼2017-08-22 11:38:25
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萧让之

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
溶胶液比推荐用量可以多一些，
赞一下(1人) 回复此楼
修和无人见，存心有天知
7楼2017-08-29 10:37:41
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