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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 关于氯霉素在接合转移中的作用
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迪妮莎的泪

新虫 (小有名气)

[求助] 关于氯霉素在接合转移中的作用 已有1人参与

最近在看三亲本接合的文献，想不明白，氯霉素不是能够抑制细菌生长吗，为什么在受体菌，辅助菌，供体菌三者混合之前，要单独添加氯霉素？这样做的意义是什么，不怕把受体菌杀死了吗？忘大神赐教

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1楼 2017-08-20 21:31:28
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迪妮莎的泪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zht930528 at 2017-08-21 14:14:40
即使外源DNA整合在染色体上，虽然抗性没那么容易丢失，但添加抗生素可以使其抗性传代稳定性增强。...

谢谢回答，我知道把三种菌混在一起加抗生素的意义，但还没有把供体菌和受体菌混合，在单独培养受体菌的时候一开始就要向LB中添加氯霉素，你在最开始的回答中说是为了维持质粒的复制，这是维持什么质粒的复制？受体菌自己本身就有的质粒？这点不太明白

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9楼2017-08-21 18:07:58
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普通回帖

迪妮莎的泪

新虫 (小有名气)
没有人吗，在网上查询这个怎么都没有查到答案。。

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2楼2017-08-20 23:19:49
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y383514131

银虫 (小有名气)
氯霉素好像可以抑制菌体生长，从而达到质粒高拷贝的目的，质粒上面应该有这个抗性

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此事说来终觉浅，莫问出处便是真
3楼2017-08-20 23:43:40
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迪妮莎的泪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by y383514131 at 2017-08-20 23:43:40
氯霉素好像可以抑制菌体生长，从而达到质粒高拷贝的目的，质粒上面应该有这个抗性

文献中写的是"把菌接入0.5*LB培养基，同时添加40mg/L的氯霉素，于30度摇床中以180rpm培养至对数期"，目的不是为了抑制菌生长吧

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4楼2017-08-21 00:50:12
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
单独加是为了保持质粒复制，结合的时候你要是担心这个抗性影响受体菌可以把供体菌或者帮助菌离心去除培养基，用新鲜的LB洗两次就ok。结合转移之前单独添加抗生素对结合转移影响并不是很大，加是为了维持质粒复制，不加其实影响也不大，单纯培养到对数期很快的。
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麻辣王子不爱做实验
5楼2017-08-21 09:41:19
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迪妮莎的泪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zht930528 at 2017-08-21 09:41:19
单独加是为了保持质粒复制，结合的时候你要是担心这个抗性影响受体菌可以把供体菌或者帮助菌离心去除培养基，用新鲜的LB洗两次就ok。结合转移之前单独添加抗生素对结合转移影响并不是很大，加是为了维持质粒复制，不 ...

好的谢谢，但还有不明白的地方，接合转移一般都是要把转坐子转到受体菌的质粒上吗？我看的这篇文献为了找到这株菌降解目标污染物的功能基因，就让转坐子mini_Tn5随机插入这株菌的基因得到突变株库，再用TAIL PCR扩增插入转坐子两测的基因，把3种菌(受体，供体，辅助)放在一起前，现在LB培养基中加氯霉素再加受体菌单独培养，是为了让受体菌的质粒比细菌本身复制得更快，是这个意思吗

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6楼2017-08-21 13:19:05
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
引用回帖:
6楼: Originally posted by 迪妮莎的泪 at 2017-08-21 13:19:05
好的谢谢，但还有不明白的地方，接合转移一般都是要把转坐子转到受体菌的质粒上吗？我看的这篇文献为了找到这株菌降解目标污染物的功能基因，就让转坐子mini_Tn5随机插入这株菌的基因得到突变株库，再用TAIL PCR扩 ...

我之前做的结合转移目的只是为了将外源的质粒转入受体菌。外源质粒可以在受体菌种复制的话，有两种情况，一是在受体菌中稳定复制传代，另外就是与受体菌本身的的染色体DNA发生整合或者同源双交换。后边在LB培养基中添加抗生素培养受体菌，也是为了使转入受体菌中的质粒能够稳定复制传代。我是这么理解的，有不对的话请批评指正。
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麻辣王子不爱做实验
7楼2017-08-21 14:13:14
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
引用回帖:
7楼: Originally posted by zht930528 at 2017-08-21 14:13:14
我之前做的结合转移目的只是为了将外源的质粒转入受体菌。外源质粒可以在受体菌种复制的话，有两种情况，一是在受体菌中稳定复制传代，另外就是与受体菌本身的的染色体DNA发生整合或者同源双交换。后边在LB培养基中 ...

即使外源DNA整合在染色体上，虽然抗性没那么容易丢失，但添加抗生素可以使其抗性传代稳定性增强。
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麻辣王子不爱做实验
8楼2017-08-21 14:14:40
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
引用回帖:
9楼: Originally posted by 迪妮莎的泪 at 2017-08-21 18:07:58
谢谢回答，我知道把三种菌混在一起加抗生素的意义，但还没有把供体菌和受体菌混合，在单独培养受体菌的时候一开始就要向LB中添加氯霉素，你在最开始的回答中说是为了维持质粒的复制，这是维持什么质粒的复制？受体 ...

受体菌刚开始就添加氯霉素培养也是为了维持其抗性的吧？ 那这个应该是受体菌本身就存在抗性（受体菌有携带相关抗性的质粒或者诱导抗性），三亲本结合转移转化子筛选是依靠颜色、形态还是抗性筛选的？
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麻辣王子不爱做实验
10楼2017-08-21 19:52:58
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