应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 关于氯霉素在接合转移中的作用
121/2返回列表12下一页
查看: 1860  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

迪妮莎的泪

新虫 (小有名气)

[求助] 关于氯霉素在接合转移中的作用 已有1人参与

最近在看三亲本接合的文献，想不明白，氯霉素不是能够抑制细菌生长吗，为什么在受体菌，辅助菌，供体菌三者混合之前，要单独添加氯霉素？这样做的意义是什么，不怕把受体菌杀死了吗？忘大神赐教

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-08-20 21:31:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

迪妮莎的泪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zht930528 at 2017-08-21 14:14:40
即使外源DNA整合在染色体上，虽然抗性没那么容易丢失，但添加抗生素可以使其抗性传代稳定性增强。...

谢谢回答，我知道把三种菌混在一起加抗生素的意义，但还没有把供体菌和受体菌混合，在单独培养受体菌的时候一开始就要向LB中添加氯霉素，你在最开始的回答中说是为了维持质粒的复制，这是维持什么质粒的复制？受体菌自己本身就有的质粒？这点不太明白

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2017-08-21 18:07:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

迪妮莎的泪

新虫 (小有名气)
没有人吗，在网上查询这个怎么都没有查到答案。。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-08-20 23:19:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

y383514131

银虫 (小有名气)
氯霉素好像可以抑制菌体生长，从而达到质粒高拷贝的目的，质粒上面应该有这个抗性

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
此事说来终觉浅，莫问出处便是真
3楼2017-08-20 23:43:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迪妮莎的泪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by y383514131 at 2017-08-20 23:43:40
氯霉素好像可以抑制菌体生长，从而达到质粒高拷贝的目的，质粒上面应该有这个抗性

文献中写的是"把菌接入0.5*LB培养基，同时添加40mg/L的氯霉素，于30度摇床中以180rpm培养至对数期"，目的不是为了抑制菌生长吧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-08-21 00:50:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
单独加是为了保持质粒复制，结合的时候你要是担心这个抗性影响受体菌可以把供体菌或者帮助菌离心去除培养基，用新鲜的LB洗两次就ok。结合转移之前单独添加抗生素对结合转移影响并不是很大，加是为了维持质粒复制，不加其实影响也不大，单纯培养到对数期很快的。
赞一下 回复此楼
麻辣王子不爱做实验
5楼2017-08-21 09:41:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迪妮莎的泪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zht930528 at 2017-08-21 09:41:19
单独加是为了保持质粒复制，结合的时候你要是担心这个抗性影响受体菌可以把供体菌或者帮助菌离心去除培养基，用新鲜的LB洗两次就ok。结合转移之前单独添加抗生素对结合转移影响并不是很大，加是为了维持质粒复制，不 ...

好的谢谢，但还有不明白的地方，接合转移一般都是要把转坐子转到受体菌的质粒上吗？我看的这篇文献为了找到这株菌降解目标污染物的功能基因，就让转坐子mini_Tn5随机插入这株菌的基因得到突变株库，再用TAIL PCR扩增插入转坐子两测的基因，把3种菌(受体，供体，辅助)放在一起前，现在LB培养基中加氯霉素再加受体菌单独培养，是为了让受体菌的质粒比细菌本身复制得更快，是这个意思吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-08-21 13:19:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
引用回帖:
6楼: Originally posted by 迪妮莎的泪 at 2017-08-21 13:19:05
好的谢谢，但还有不明白的地方，接合转移一般都是要把转坐子转到受体菌的质粒上吗？我看的这篇文献为了找到这株菌降解目标污染物的功能基因，就让转坐子mini_Tn5随机插入这株菌的基因得到突变株库，再用TAIL PCR扩 ...

我之前做的结合转移目的只是为了将外源的质粒转入受体菌。外源质粒可以在受体菌种复制的话，有两种情况，一是在受体菌中稳定复制传代，另外就是与受体菌本身的的染色体DNA发生整合或者同源双交换。后边在LB培养基中添加抗生素培养受体菌，也是为了使转入受体菌中的质粒能够稳定复制传代。我是这么理解的，有不对的话请批评指正。
赞一下 回复此楼
麻辣王子不爱做实验
7楼2017-08-21 14:13:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
引用回帖:
7楼: Originally posted by zht930528 at 2017-08-21 14:13:14
我之前做的结合转移目的只是为了将外源的质粒转入受体菌。外源质粒可以在受体菌种复制的话，有两种情况，一是在受体菌中稳定复制传代，另外就是与受体菌本身的的染色体DNA发生整合或者同源双交换。后边在LB培养基中 ...

即使外源DNA整合在染色体上，虽然抗性没那么容易丢失，但添加抗生素可以使其抗性传代稳定性增强。
赞一下 回复此楼
麻辣王子不爱做实验
8楼2017-08-21 14:14:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
引用回帖:
9楼: Originally posted by 迪妮莎的泪 at 2017-08-21 18:07:58
谢谢回答，我知道把三种菌混在一起加抗生素的意义，但还没有把供体菌和受体菌混合，在单独培养受体菌的时候一开始就要向LB中添加氯霉素，你在最开始的回答中说是为了维持质粒的复制，这是维持什么质粒的复制？受体 ...

受体菌刚开始就添加氯霉素培养也是为了维持其抗性的吧？ 那这个应该是受体菌本身就存在抗性（受体菌有携带相关抗性的质粒或者诱导抗性），三亲本结合转移转化子筛选是依靠颜色、形态还是抗性筛选的？
赞一下 回复此楼
麻辣王子不爱做实验
10楼2017-08-21 19:52:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 迪妮莎的泪 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +3 瞬息宇宙 2026-08-12 3/150 2026-08-13 06:40 by 玲珑133
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +8 majunge000 2026-08-10 9/450 2026-08-12 22:17 by 虫友是什么虫
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +10 Tide man 2026-08-11 10/500 2026-08-12 20:59 by 陈晨晨陈啊
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭