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萤火一朵227

新虫 (小有名气)

[求助] 杀菌实验对照组溶于PBS的菌急剧下降怎么办 已有3人参与

最近做杀菌实验,把细菌溶于PBS中后做杀菌实验,发现对照组也就是只溶于PBS的细菌数急剧下降,做平板菌落计数死的比实验组还快,我知道细菌洗涤后保存在PBS中死的比较快,但是由于之前做同样的实验对照组在6h内细菌数基本保持不变,查了好多文献也很多把菌悬在PBS中做杀菌实验的,现在处于找不到找不到原因的焦躁状态,本人非生物专业,对此了解不多,有没有哪位大神能指点一二?万分感激!

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snoopytbw

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PBS重悬后,细菌是不会死那么快的。我估计你的PBS被杀菌剂污染了,这是一种可能性。也有可能PBS配置不当,里面的盐发生了微小结晶,细菌会吸附上去,然后沉降,如果用OD值测,就会降了。第三种可能性,你做的PBS对照菌浓度过大,菌体会几个聚集,缓慢沉降,时间越久,OD值越低。

检查下,PBS污染,配方,然后看看文献里面的阴性对照组菌浓度。还有你做的啥菌,能不能用OD值或者麦氏比浊呢?这个显然不是菌死的问题!!
2楼2017-08-22 08:52:47
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萤火一朵227

新虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-22 08:52:47
PBS重悬后,细菌是不会死那么快的。我估计你的PBS被杀菌剂污染了,这是一种可能性。也有可能PBS配置不当,里面的盐发生了微小结晶,细菌会吸附上去,然后沉降,如果用OD值测,就会降了。第三种可能性,你做的PBS对照 ...

非常感谢您的回复!实验中对照组和实验组的菌都是用PBS溶的(用LB培养后用PBS洗后再重新溶于PBS中),不过实验组加了材料,材料是粉末状的,分散性并不好,用OD测会影响吸光度,所以没用这个方法测。菌试了表皮和金葡,其实实验组的菌死的比对照组的菌是要多的,但是由于对照组就死的很多,因此数据就没有意义了,

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3楼2017-08-22 10:29:31
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snoopytbw

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3楼: Originally posted by 萤火一朵227 at 2017-08-22 10:29:31
非常感谢您的回复!实验中对照组和实验组的菌都是用PBS溶的(用LB培养后用PBS洗后再重新溶于PBS中),不过实验组加了材料,材料是粉末状的,分散性并不好,用OD测会影响吸光度,所以没用这个方法测。菌试了表皮和金 ...

PBS下的细菌重悬后,不会死的那么快的。肯定是有哪里出了问题!在LB培养后重悬之前,有没有用PBS洗涤下,另外,严重怀疑灭菌物质污染!灭菌粉末,你可以先溶解了,过滤除菌后再用的!方便的话,可以告之是什么灭菌物质么

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4楼2017-08-22 10:46:36
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萤火一朵227

新虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-22 10:46:36
PBS下的细菌重悬后,不会死的那么快的。肯定是有哪里出了问题!在LB培养后重悬之前,有没有用PBS洗涤下,另外,严重怀疑灭菌物质污染!灭菌粉末,你可以先溶解了,过滤除菌后再用的!方便的话,可以告之是什么灭菌 ...

细菌用LB培养后用PBS离心清洗了三次左右,然后用PBS重溶后,之后倍比稀释到不同梯度后涂板,然后再推算各个稀释梯度对应的菌的浓度(cfu/ml),再把所需浓度的菌液加材料做实验,我的材料是具有杀菌活性的纳米材料,根本溶不了,每次做之前我都是用紫外照后加到菌液中的。因为从将菌从LB中培养到稀释计数再到加材料做实验可能要个几天,所以目前我怀疑是因为菌在PBS中缺乏营养所致,不过又觉得那里有点不对

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5楼2017-08-22 11:04:02
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snoopytbw

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5楼: Originally posted by 萤火一朵227 at 2017-08-22 11:04:02
细菌用LB培养后用PBS离心清洗了三次左右,然后用PBS重溶后,之后倍比稀释到不同梯度后涂板,然后再推算各个稀释梯度对应的菌的浓度(cfu/ml),再把所需浓度的菌液加材料做实验,我的材料是具有杀菌活性的纳米材料 ...

不会是东南的吧,纳米胶体颗粒?我看过一篇文献,用的是邻苯二甲酸酯分散体系做的纳米颗粒,用来杀菌的。纳米颗粒杀菌的原理,通常都是吸附失活,或者通过纳米半导体材料,直接抑制呼吸链,抑制电子传递,菌都是饿死的。如果是PBS的问题,建议可以用寡营养培养基,可以搜下文献,配方都有。或者用解磷菌的培养基,其实本质都差不多,就是营养控制在最低限。相关文献有很多,查查看!

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6楼2017-08-22 11:10:16
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萤火一朵227

新虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-22 11:10:16
不会是东南的吧,纳米胶体颗粒?我看过一篇文献,用的是邻苯二甲酸酯分散体系做的纳米颗粒,用来杀菌的。纳米颗粒杀菌的原理,通常都是吸附失活,或者通过纳米半导体材料,直接抑制呼吸链,抑制电子传递,菌都是饿 ...

不是东南的哈,我其实是学医的,误打误撞在做材料和菌,所以很多都不懂。其实昨天有接菌到LB中培养然后直接用PBS稀释一定倍数再涂板,就想试下看残留一定的培养基维持一定的营养会不会好些,不过结果还没出来。非常谢谢大神的指点,我去查下资料再试试看

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7楼2017-08-22 11:54:23
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snoopytbw

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7楼: Originally posted by 萤火一朵227 at 2017-08-22 11:54:23
不是东南的哈,我其实是学医的,误打误撞在做材料和菌,所以很多都不懂。其实昨天有接菌到LB中培养然后直接用PBS稀释一定倍数再涂板,就想试下看残留一定的培养基维持一定的营养会不会好些,不过结果还没出来。非常 ...

寡营养培养基,我记得里面也没啥营养。你查查看

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8楼2017-08-22 16:40:09
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萤火一朵227

新虫 (小有名气)

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8楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-22 16:40:09
寡营养培养基,我记得里面也没啥营养。你查查看...

嗯嗯,好的,非常谢谢

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9楼2017-08-22 20:38:22
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abc19561956

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主您好,打扰了,请问您的问题解决了么,我也遇到了相同的问题,希望您 能回复一下,十分感谢。
10楼2019-06-16 11:22:30
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