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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 杀菌实验对照组溶于PBS的菌急剧下降怎么办
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萤火一朵227

新虫 (小有名气)

[求助] 杀菌实验对照组溶于PBS的菌急剧下降怎么办 已有3人参与

最近做杀菌实验，把细菌溶于PBS中后做杀菌实验，发现对照组也就是只溶于PBS的细菌数急剧下降，做平板菌落计数死的比实验组还快，我知道细菌洗涤后保存在PBS中死的比较快，但是由于之前做同样的实验对照组在6h内细菌数基本保持不变，查了好多文献也很多把菌悬在PBS中做杀菌实验的，现在处于找不到找不到原因的焦躁状态，本人非生物专业，对此了解不多，有没有哪位大神能指点一二？万分感激！

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1楼 2017-08-20 20:48:35
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snoopytbw

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PBS重悬后，细菌是不会死那么快的。我估计你的PBS被杀菌剂污染了，这是一种可能性。也有可能PBS配置不当，里面的盐发生了微小结晶，细菌会吸附上去，然后沉降，如果用OD值测，就会降了。第三种可能性，你做的PBS对照菌浓度过大，菌体会几个聚集，缓慢沉降，时间越久，OD值越低。

检查下，PBS污染，配方，然后看看文献里面的阴性对照组菌浓度。还有你做的啥菌，能不能用OD值或者麦氏比浊呢？这个显然不是菌死的问题！！
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2楼2017-08-22 08:52:47
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萤火一朵227

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-22 08:52:47
PBS重悬后，细菌是不会死那么快的。我估计你的PBS被杀菌剂污染了，这是一种可能性。也有可能PBS配置不当，里面的盐发生了微小结晶，细菌会吸附上去，然后沉降，如果用OD值测，就会降了。第三种可能性，你做的PBS对照 ...

非常感谢您的回复！实验中对照组和实验组的菌都是用PBS溶的（用LB培养后用PBS洗后再重新溶于PBS中），不过实验组加了材料，材料是粉末状的，分散性并不好，用OD测会影响吸光度，所以没用这个方法测。菌试了表皮和金葡，其实实验组的菌死的比对照组的菌是要多的，但是由于对照组就死的很多，因此数据就没有意义了，

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3楼2017-08-22 10:29:31
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snoopytbw

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3楼: Originally posted by 萤火一朵227 at 2017-08-22 10:29:31
非常感谢您的回复！实验中对照组和实验组的菌都是用PBS溶的（用LB培养后用PBS洗后再重新溶于PBS中），不过实验组加了材料，材料是粉末状的，分散性并不好，用OD测会影响吸光度，所以没用这个方法测。菌试了表皮和金 ...

PBS下的细菌重悬后，不会死的那么快的。肯定是有哪里出了问题！在LB培养后重悬之前，有没有用PBS洗涤下，另外，严重怀疑灭菌物质污染！灭菌粉末，你可以先溶解了，过滤除菌后再用的！方便的话，可以告之是什么灭菌物质么
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萤火一朵227
4楼2017-08-22 10:46:36
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萤火一朵227

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4楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-22 10:46:36
PBS下的细菌重悬后，不会死的那么快的。肯定是有哪里出了问题！在LB培养后重悬之前，有没有用PBS洗涤下，另外，严重怀疑灭菌物质污染！灭菌粉末，你可以先溶解了，过滤除菌后再用的！方便的话，可以告之是什么灭菌 ...

细菌用LB培养后用PBS离心清洗了三次左右，然后用PBS重溶后，之后倍比稀释到不同梯度后涂板，然后再推算各个稀释梯度对应的菌的浓度（cfu/ml），再把所需浓度的菌液加材料做实验，我的材料是具有杀菌活性的纳米材料，根本溶不了，每次做之前我都是用紫外照后加到菌液中的。因为从将菌从LB中培养到稀释计数再到加材料做实验可能要个几天，所以目前我怀疑是因为菌在PBS中缺乏营养所致，不过又觉得那里有点不对

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5楼2017-08-22 11:04:02
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snoopytbw

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5楼: Originally posted by 萤火一朵227 at 2017-08-22 11:04:02
细菌用LB培养后用PBS离心清洗了三次左右，然后用PBS重溶后，之后倍比稀释到不同梯度后涂板，然后再推算各个稀释梯度对应的菌的浓度（cfu/ml），再把所需浓度的菌液加材料做实验，我的材料是具有杀菌活性的纳米材料 ...

不会是东南的吧，纳米胶体颗粒？我看过一篇文献，用的是邻苯二甲酸酯分散体系做的纳米颗粒，用来杀菌的。纳米颗粒杀菌的原理，通常都是吸附失活，或者通过纳米半导体材料，直接抑制呼吸链，抑制电子传递，菌都是饿死的。如果是PBS的问题，建议可以用寡营养培养基，可以搜下文献，配方都有。或者用解磷菌的培养基，其实本质都差不多，就是营养控制在最低限。相关文献有很多，查查看！
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萤火一朵227
6楼2017-08-22 11:10:16
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萤火一朵227

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6楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-22 11:10:16
不会是东南的吧，纳米胶体颗粒？我看过一篇文献，用的是邻苯二甲酸酯分散体系做的纳米颗粒，用来杀菌的。纳米颗粒杀菌的原理，通常都是吸附失活，或者通过纳米半导体材料，直接抑制呼吸链，抑制电子传递，菌都是饿 ...

不是东南的哈，我其实是学医的，误打误撞在做材料和菌，所以很多都不懂。其实昨天有接菌到LB中培养然后直接用PBS稀释一定倍数再涂板，就想试下看残留一定的培养基维持一定的营养会不会好些，不过结果还没出来。非常谢谢大神的指点，我去查下资料再试试看

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7楼2017-08-22 11:54:23
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snoopytbw

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7楼: Originally posted by 萤火一朵227 at 2017-08-22 11:54:23
不是东南的哈，我其实是学医的，误打误撞在做材料和菌，所以很多都不懂。其实昨天有接菌到LB中培养然后直接用PBS稀释一定倍数再涂板，就想试下看残留一定的培养基维持一定的营养会不会好些，不过结果还没出来。非常 ...

寡营养培养基，我记得里面也没啥营养。你查查看
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萤火一朵227
8楼2017-08-22 16:40:09
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萤火一朵227

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8楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-22 16:40:09
寡营养培养基，我记得里面也没啥营养。你查查看...

嗯嗯，好的，非常谢谢

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9楼2017-08-22 20:38:22
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abc19561956

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主您好，打扰了，请问您的问题解决了么，我也遇到了相同的问题，希望您 能回复一下，十分感谢。
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10楼2019-06-16 11:22:30
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