| 查看: 1644 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
关于菌批验证结果和测序结果不一致的原因
|
|||
|
通过酶切和酶连构建一个载体，我做菌批验证的时候，用的是我自己片段的引物验证，能够p出来正确的条带，然后我送去测序，测序结果是空载体。 请问这是为什么？ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
各位老师好，我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕
已经有12人回复
-
359求调剂
已经有7人回复
-
070300化学专业279调剂
已经有10人回复
-
环境工程297分求调剂一志愿杭高院
已经有9人回复
-
一志愿武理材料工程302调剂环化或化工
已经有9人回复
-
309分085801求调剂
已经有5人回复
-
一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕
已经有5人回复
-
材料调剂
已经有4人回复
-
材料调剂
已经有3人回复
-
311（085601）求调剂
已经有12人回复
送红花一朵 |
您好，请问阴性对照怎么个做法。我是用我自己片段的引物批的，师兄说他都用载体上的通用引物批，然后我用通用引物批了一下，的确还是空载。所以我现在就是好奇哪里出了问题，怎么用我自己引物会批出条带，一般是怎么个污染法呢？ 谢谢。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-08-20 12:55:08
18253592055
管理员
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 931.1
- 散金: 1090
- 红花: 13
- 帖子: 531
- 在线: 90.5小时
- 虫号: 2727819
- 注册: 2013-10-15
- 性别: GG
- 专业: 细胞、亚细胞结构与功能
|
你说的是菌批验证是菌落pcr？如果是的话，不知道你做的时候有没有做隐性对照，如果没做的话可能是污染了，如果做了阴性没有带，其他的有目的条带的话我建议以测序结果为准 发自小木虫IOS客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
2楼2017-08-19 23:20:48
18253592055
兑换贵宾
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 931.1
- 散金: 1090
- 红花: 13
- 帖子: 531
- 在线: 90.5小时
- 虫号: 2727819
- 注册: 2013-10-15
- 性别: GG
- 专业: 细胞、亚细胞结构与功能
|
其实用载体上的引物和你自己的引物没有区别，如果照你这么说很大的可能是你本身引起的问题，一是你的引物特异性不高，你pcr里的条带是杂带只不过大小刚好跟你要的目的条带一样，而是你的引物在稀释或者使用过程中污染了。建议你在做的时候其中一个平行管里不加模版也就是不加菌，其他都一样作为阴性（目的看你的引物有没有污染），另外可以加一个以空载质粒为模版的管（质粒稀释成1ng/ul，pcr体系中加1ul，目的是看你的引物是不是特异性不高）希望我说的你能明白 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-08-20 14:25:39
18253592055
版主
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 931.1
- 散金: 1090
- 红花: 13
- 帖子: 531
- 在线: 90.5小时
- 虫号: 2727819
- 注册: 2013-10-15
- 性别: GG
- 专业: 细胞、亚细胞结构与功能
5楼2017-08-20 14:27:03
