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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr平末端产物如何加A尾巴？？
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zyfskj

新虫 (著名写手)

[求助] pcr平末端产物如何加A尾巴？？ 已有2人参与

用高保真的酶扩增的产物如何加A尾巴用于TA克隆，求确切的体系

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向我乞求怜悯吧，我会狠狠拒绝的。
1楼 2017-08-15 16:22:28
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
加点taq酶 72℃ 温浴个10min 左右。
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麻辣王子不爱做实验
5楼2017-08-16 11:11:41
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学长阿亮

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zyfskj: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-08-17 09:01:37
10X PCR buffer：1微升
dNTP:0.8微升
回收产物：8.1微升
rTaq:0.1微升
72℃ 20min
回收产物浓度控制在50ng/μl
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

zyfskj
7楼2017-08-16 20:57:01
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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)
用宝生物的ExTaq预混酶。以前我做pcr、做TA克隆用这个。

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2楼2017-08-15 16:39:16
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
高保真的酶扩增完成后用taq酶处理一下就行了
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3楼2017-08-16 09:25:08
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zyfskj

新虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 学长阿亮 at 2017-08-16 20:57:01
10X PCR buffer：1微升
dNTP:0.8微升
回收产物：8.1微升
rTaq:0.1微升
72℃ 20min
回收产物浓度控制在50ng/μl

我想问下，，Taq buffer  就叫Taq buffer 还是说r Taq 里自带的buffer

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向我乞求怜悯吧，我会狠狠拒绝的。
8楼2017-08-17 08:54:47
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普通回帖

zyfskj

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-08-16 09:25:08
高保真的酶扩增完成后用taq酶处理一下就行了

How

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4楼2017-08-16 11:05:50
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zyfskj

新虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zht930528 at 2017-08-16 11:11:41
加点taq酶 72℃ 温浴个10min 左右。

具体体系呢

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向我乞求怜悯吧，我会狠狠拒绝的。
6楼2017-08-16 19:11:27
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zyfskj

新虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zyfskj at 2017-08-17 08:54:47
我想问下，，Taq buffer  就叫Taq buffer 还是说r Taq 里自带的buffer
...

说错了pcr buffer

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向我乞求怜悯吧，我会狠狠拒绝的。
9楼2017-08-17 08:56:03
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zyfskj

新虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 学长阿亮 at 2017-08-16 20:57:01
10X PCR buffer：1微升
dNTP:0.8微升
回收产物：8.1微升
rTaq:0.1微升
72℃ 20min
回收产物浓度控制在50ng/μl

加上A
后可以直接连接T了对吗

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向我乞求怜悯吧，我会狠狠拒绝的。
10楼2017-08-17 09:00:40
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