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qhiv6

新虫 (小有名气)

[交流] 上下游引物退火温度相差太大,退火温度梯度应该如何设置? 已有6人参与

原来设计的引物时候没太注意,今天拿出来要做了才发现,上下游引物Tm值相差8℃,一个50一个58,请问摸退火温度的梯度应该如何设置?

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real-time

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
要最好的结果就是做梯度,从50-60设几个梯度一做就知道了,软件和经验评估出来的温度没有实验结果有说服力!
如果只是要个心理安慰或者自欺欺人的结论就取平均值或者.....................
一步法逆转录RNA多重实时荧光定量PCR课题服务QQ461749807
11楼2017-08-18 11:29:29
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
取平均值上下也行

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
2楼2017-08-14 21:17:42
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
从55往下,2度一个剃度

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3楼2017-08-14 21:17:51
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
经验是这个不影响,一般看产物的TM,引物只要GC值在许可范围即可。实在不行,做温度梯度PCR,看下结果
4楼2017-08-15 08:37:04
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