应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 上下游引物退火温度相差太大，退火温度梯度应该如何设置？
121/2返回列表12下一页
查看: 7898  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qhiv6

新虫 (小有名气)

[交流] 上下游引物退火温度相差太大，退火温度梯度应该如何设置？ 已有6人参与

原来设计的引物时候没太注意，今天拿出来要做了才发现，上下游引物Tm值相差8℃，一个50一个58，请问摸退火温度的梯度应该如何设置？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-08-14 21:04:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

极北小白熊

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
从55往下，2度一个剃度

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-08-14 21:17:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
经验是这个不影响，一般看产物的TM，引物只要GC值在许可范围即可。实在不行，做温度梯度PCR，看下结果
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-08-15 08:37:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qhiv6 at 2017-08-15 16:13:54
做了，不行，都没有条带，49-59每2度一个
...

那就是引物降解了，是不是用纯水溶的啊，最好用TE，避免反复冻融。如果这个引物一开始是可以做的话，那么可以考虑降解
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2017-08-16 08:39:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学长阿亮

铁虫 (初入文坛)
你可以换一下酶，我用过一些酶它们对退火温度要求没那么严格，我有时候上下游引物差十多度一样可以跑出，根本不需要梯度
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2017-08-16 20:54:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
取平均值上下也行

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
2楼2017-08-14 21:17:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-15 08:37:04
经验是这个不影响，一般看产物的TM，引物只要GC值在许可范围即可。实在不行，做温度梯度PCR，看下结果

做了，不行，都没有条带，49-59每2度一个

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-08-15 16:13:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

艾喵喵

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你可以一度一个梯度试试

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-08-15 17:52:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-16 08:39:44
那就是引物降解了，是不是用纯水溶的啊，最好用TE，避免反复冻融。如果这个引物一开始是可以做的话，那么可以考虑降解...

第一次使用，好的，谢谢！！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-08-16 20:44:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 学长阿亮 at 2017-08-16 20:54:01
你可以换一下酶，我用过一些酶它们对退火温度要求没那么严格，我有时候上下游引物差十多度一样可以跑出，根本不需要梯度

那你退火温度怎么设置的？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2017-08-17 08:28:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qhiv6 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +11 晴天加油 2026-08-26 12/600 2026-08-28 01:22 by li09465290@
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 XLGfUIdOmEAO 2026-08-27 3/150 2026-08-28 00:49 by 3RAFyYXYSwGS
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +7 苏东坡二世 2026-08-23 7/350 2026-08-27 18:14 by 瞬息宇宙
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭