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memo989

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 重叠延伸pcr的条件问题已有1人参与

希望将两个片段融合为一个片段，已扩增出单独的两个片段（两个片段有互补部分，约70bp）我的问题是，下一步如何融合？条件是什么？加的片段浓度要求是多少？

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1楼 2017-08-14 17:01:27

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xmcw765

新虫 (初入文坛)

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片段1的上游引物加片段2的下游引物，按正常体系加

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2楼2017-08-14 19:25:20

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晋鹏

版主 (知名作家)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-08-15 07:04:25

方法可参考Nat Protoc. 2006;1(2):791-7.
PCR-based accurate synthesis of long DNA sequences.
文章里用overlap pcr将小片段组装成较大的片段。
个人感觉片段割胶回收后，在体系里每个片段加20纳克就足够了。
片段之间的overlap至少要有20bp，在50-55度退火。

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及时行乐，人生不留遗憾！

3楼2017-08-14 21:56:45

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memo989

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-08-14 21:56:45
方法可参考Nat Protoc. 2006;1(2):791-7.
PCR-based accurate synthesis of long DNA sequences.
文章里用overlap pcr将小片段组装成较大的片段。
个人感觉片段割胶回收后，在体系里每个片段加20纳克就足够了。
...

谢谢！

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4楼2017-08-15 10:36:24

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