应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 光谱分析 » 4cl酶反应体系使用液相检测的一些问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 991  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

max小线

新虫 (初入文坛)

[求助] 4cl酶反应体系使用液相检测的一些问题

本人萌新，最近在做4cl家族基因的重组蛋白和五种底物酚酸反应的实验，反应体系中存在0.6mM CoA、5mM ATP、6mM MgCl2、0.2M Tris-Hcl、0.2mM 酚酸底物以及浓度不明的重组蛋白。配制了7种不同PH的Tris-Hcl缓冲液（PH=4、5、6、7.1、7.5、8.1、8.9），体系反应10分钟后，沸水煮沸10分钟失活，现使用对香豆酸和酶反应，反应后经12000RAM离心2min后用0.22um过滤头过滤，进样10ul，使用的是XDB-C18的柱子，waters2695的色谱仪，流动相为A1%乙酸和B纯乙腈，洗脱梯度0~5min A：B=95:5,5-35min A：B=25：75，36-5,5min A:B=95:5，56-65min A：B=5:95  进样后发现，除了PH=7.1的样品外其他的样品都没有底物（对-香豆酸）峰，并且所有样品都没有产物（对-香豆酸辅酶A）峰，能请教一下各位大神，怎么解决这个问题
        另外还有一个问题，五种酚酸跑混标的时候，芥子酸和阿魏酸总是分不开，大神有没有什么好的方法将他们分开（尽量不使用缓冲盐体系作为流动相），多谢各位了@wyy080214
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-08-14 11:14:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjjc2012

捐助贵宾 (著名写手)
你用单一的底物和产物走过柱子吗？确信他们在这个液相条件下会出峰？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2017-08-14 13:23:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

max小线

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yjjc2012 at 2017-08-14 13:23:00
你用单一的底物和产物走过柱子吗？确信他们在这个液相条件下会出峰？

单一的底物走过柱子，能出峰，产物买不到，打算检测底物的减少量来计算产物的生成量
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-08-14 14:22:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjjc2012

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by max小线 at 2017-08-14 14:22:01
单一的底物走过柱子，能出峰，产物买不到，打算检测底物的减少量来计算产物的生成量...

建议先用lcms确认产物生成，再设法分离纯化出少量产物，用于液相定位和分析条件调整

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-08-14 14:27:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

max小线

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yjjc2012 at 2017-08-14 14:27:40
建议先用lcms确认产物生成，再设法分离纯化出少量产物，用于液相定位和分析条件调整
...

没有液质联用，我也想打个色谱

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-08-14 17:39:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

max小线

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yjjc2012 at 2017-08-14 14:27:40
建议先用lcms确认产物生成，再设法分离纯化出少量产物，用于液相定位和分析条件调整
...

我也想打个质谱，但是没有仪器，今天又跑了一下，现在是ph=6、7.1下有两个峰，其他ph没有峰

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-08-14 17:42:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjjc2012

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by max小线 at 2017-08-14 17:39:58
没有液质联用，我也想打个色谱
...

至少做个tlc,把新的点刮下来打个核磁，确认一下产物

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2017-08-14 19:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fright1131

新虫 (初入文坛)
你解决了吗

发自小木虫Android客户端
回复此楼
8楼2019-09-03 21:37:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 max小线 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 322求调剂 +7 宋明欣 2026-03-27 7/350 2026-03-28 21:27 by sanrepian
[考研] 化学0703 调剂 306分 一志愿211 +4 26要上岸 2026-03-28 4/200 2026-03-28 15:30 by 1018329917
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 4/200 2026-03-28 14:30 by QiMing7
[考研] 347求调剂 +3 山顶见α 2026-03-25 3/150 2026-03-28 14:13 by 唐沐儿
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +3 萝卜炖青菜 2026-03-28 3/150 2026-03-28 14:11 by 唐沐儿
[考研] 339求调剂，想调回江苏 +6 烤麦芽 2026-03-27 8/400 2026-03-28 10:40 by 烤麦芽
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +7 hanamiko 2026-03-27 7/350 2026-03-28 09:56 by 李上岸0921
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 考研调剂 +10 呼呼？~+123456 2026-03-24 10/500 2026-03-27 11:46 by wangjy2002
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +4 柳溪边 2026-03-26 4/200 2026-03-26 21:14 by XPU李庆
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭