应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 光谱分析 » 4cl酶反应体系使用液相检测的一些问题
81/1返回列表
查看: 1146  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

max小线

新虫 (初入文坛)

[求助] 4cl酶反应体系使用液相检测的一些问题

本人萌新，最近在做4cl家族基因的重组蛋白和五种底物酚酸反应的实验，反应体系中存在0.6mM CoA、5mM ATP、6mM MgCl2、0.2M Tris-Hcl、0.2mM 酚酸底物以及浓度不明的重组蛋白。配制了7种不同PH的Tris-Hcl缓冲液（PH=4、5、6、7.1、7.5、8.1、8.9），体系反应10分钟后，沸水煮沸10分钟失活，现使用对香豆酸和酶反应，反应后经12000RAM离心2min后用0.22um过滤头过滤，进样10ul，使用的是XDB-C18的柱子，waters2695的色谱仪，流动相为A1%乙酸和B纯乙腈，洗脱梯度0~5min A：B=95:5,5-35min A：B=25：75，36-5,5min A:B=95:5，56-65min A：B=5:95  进样后发现，除了PH=7.1的样品外其他的样品都没有底物（对-香豆酸）峰，并且所有样品都没有产物（对-香豆酸辅酶A）峰，能请教一下各位大神，怎么解决这个问题
        另外还有一个问题，五种酚酸跑混标的时候，芥子酸和阿魏酸总是分不开，大神有没有什么好的方法将他们分开（尽量不使用缓冲盐体系作为流动相），多谢各位了@wyy080214
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-08-14 11:14:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjjc2012

捐助贵宾 (著名写手)
你用单一的底物和产物走过柱子吗？确信他们在这个液相条件下会出峰？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2017-08-14 13:23:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

max小线

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yjjc2012 at 2017-08-14 13:23:00
你用单一的底物和产物走过柱子吗？确信他们在这个液相条件下会出峰？

单一的底物走过柱子，能出峰，产物买不到，打算检测底物的减少量来计算产物的生成量
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-08-14 14:22:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjjc2012

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by max小线 at 2017-08-14 14:22:01
单一的底物走过柱子，能出峰，产物买不到，打算检测底物的减少量来计算产物的生成量...

建议先用lcms确认产物生成，再设法分离纯化出少量产物，用于液相定位和分析条件调整

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-08-14 14:27:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

max小线

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yjjc2012 at 2017-08-14 14:27:40
建议先用lcms确认产物生成，再设法分离纯化出少量产物，用于液相定位和分析条件调整
...

没有液质联用，我也想打个色谱

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-08-14 17:39:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

max小线

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yjjc2012 at 2017-08-14 14:27:40
建议先用lcms确认产物生成，再设法分离纯化出少量产物，用于液相定位和分析条件调整
...

我也想打个质谱，但是没有仪器，今天又跑了一下，现在是ph=6、7.1下有两个峰，其他ph没有峰

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-08-14 17:42:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjjc2012

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by max小线 at 2017-08-14 17:39:58
没有液质联用，我也想打个色谱
...

至少做个tlc,把新的点刮下来打个核磁，确认一下产物

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2017-08-14 19:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fright1131

新虫 (初入文坛)
你解决了吗

发自小木虫Android客户端
回复此楼
8楼2019-09-03 21:37:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 max小线 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode +7 布布和一二 2026-08-06 10/500 2026-08-06 16:22 by janehuiminli
[基金申请] 听说今天filecode变了 +3 布布和一二 2026-08-06 3/150 2026-08-06 16:22 by yq199112088
[基金申请] filecode +8 等待解的谜 2026-08-06 12/600 2026-08-06 16:11 by janehuiminli
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +4 Tide man 2026-08-06 5/250 2026-08-06 16:08 by janehuiminli
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 12/600 2026-08-06 15:11 by eddyin
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭