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小火棍灬

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 31.2
帖子: 8
在线: 1.9小时
虫号: 7056325
注册: 2017-08-13
专业: 水产资源与保护学

[求助] PCR条带弥散已有2人参与

这对引物原来很好的，没做多久成了这样子，模板用其他引物也正常可以跑出来，有没有战友遇到过这情况啊，急求，在线等！！

@youlinglyw 发自小木虫IOS客户端

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1楼 2017-08-13 10:19:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

晋鹏

版主 (知名作家)

MolEPI: 6
应助: 626 (博士)
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注册: 2011-01-05
性别: GG
专业: 生物信息学
管辖: 农林

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

首先怀疑,特异性不好,解决办法：
1,可能是模板量过高,降低模板浓度10-1000倍；
2,适当提高退火温度1-3度,或者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环,再用先前温度p剩余的循环（也就是在程序中多设置2步）；
3,稍降Mg离子浓度,如果以前加1.5ul的,试试1-1.2ul；
如果以上方案还不能解决,就要检查你的模板、引物和taq,重新提模板、重新稀释引物,以及用新的pcr试剂.