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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR条带弥散
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小火棍灬

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR条带弥散 已有2人参与

这对引物原来很好的，没做多久成了这样子，模板用其他引物也正常可以跑出来，有没有战友遇到过这情况啊，急求，在线等！！

PCR条带弥散


@youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2017-08-13 10:19:25
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先怀疑,特异性不好,解决办法：
1,可能是模板量过高,降低模板浓度10-1000倍；
2,适当提高退火温度1-3度,或者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环,再用先前温度p剩余的循环（也就是在程序中多设置2步）；
3,稍降Mg离子浓度,如果以前加1.5ul的,试试1-1.2ul；
如果以上方案还不能解决,就要检查你的模板、引物和taq,重新提模板、重新稀释引物,以及用新的pcr试剂.
赞一下 回复此楼
及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-08-13 14:58:33
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
二聚体这么多。。。。而且有弥散带，估计是引物错配和无法锚定位点，多半挂了。
赞一下 回复此楼
3楼2017-08-15 08:42:35
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