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王木木2016新虫 (小有名气)
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纯化后的蛋白电泳不出目的条带 已有1人参与
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我的蛋白是可溶性蛋白，纯化后洗脱液能看到白色沉淀，之前电泳出目的条带了，但最近电泳不出来目的条带了，请问是什么原因啊？ 发自小木虫Android客户端 |
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晋鹏
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【答案】应助回帖
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1: 参考抗体说明书，准备阳性对照，刚买的抗体一定要做这一步，排除抗体质量的问题。 2:在抗体没有失效的情况下，检测下面几个问题 a：细胞一般是不会出神马问题的，但是裂解液这个东西还是需要考虑的。遇到一个很经典的事情，用得公司买的RIPA裂解细胞，beta-actin的条带好看的不得了，目的条带就是木有，后来发现就是裂解液出问题的，换了裂解液立马正常了。 b：样品木有问题了，遇到不好用得抗体，加大上样量，有助于条带的出现。 根据目的蛋白选择合适的胶的浓度，以及转膜的时间（这个还是很重要，转膜不充分，转膜过了都会导致目的条带出不来）。 一抗最好4°过夜。 洗膜的缓冲液的PH还是很重要，要调准。 后面二抗应该不会出神马问题的，但是还是需要考虑的。 曝光延长时间。 每一步出错都有可能导致条带出不来的。你没有写具体的步骤，上面只是讲了下我想到的要注意的几方面的问题，希望对你有帮助。 |
2楼2017-08-13 15:00:12