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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 纯化蛋白质谱鉴定
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转身遇到

新虫 (初入文坛)

[交流] 纯化蛋白质谱鉴定

真菌效应蛋白经大肠杆菌原核表达纯化后质谱鉴定，匹配出来的是大肠杆菌的蛋白，可能原因是什么呢？克隆菌株测序是正确的，表达菌株有问题吗？还是鉴定出错了？还是别的原因呢？对这方面还不太懂，希望得到有经验的朋友帮助，非常感谢！

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1楼 2017-08-12 11:32:48
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biotpack2

捐助贵宾 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
克隆对而且诱导以后有蛋白表达，应该就够确定转入的蛋白有表达。至于鉴定出大肠杆菌蛋白，有可能是你制备的蛋白样品不够纯，里面混杂了比较多大肠杆菌的蛋白，因此，鉴定到大肠杆菌的蛋白很正常。建议送蛋白鉴定前，跑胶分离蛋白，蛋白尽量分的开一些，另外制备样品尽量保证使用的器具，溶液都是干净无污染的。但是至于没有坚定到你表达的真菌蛋白，具体要看比对蛋白选用的数据库是否包含了真菌蛋白的数据库，不然是无法鉴定到真菌蛋白的。
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4楼2017-08-14 12:08:46
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
实际没有表达

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2楼2017-08-12 11:48:46
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转身遇到

新虫 (初入文坛)
谢谢，可是我诱导表达后跑胶有目的条带呢，那条带不是大肠杆菌表达的吧

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3楼2017-08-12 12:00:10
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转身遇到

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by biotpack2 at 2017-08-14 12:08:46
克隆对而且诱导以后有蛋白表达，应该就够确定转入的蛋白有表达。至于鉴定出大肠杆菌蛋白，有可能是你制备的蛋白样品不够纯，里面混杂了比较多大肠杆菌的蛋白，因此，鉴定到大肠杆菌的蛋白很正常。建议送蛋白鉴定前， ...

嗯，谢谢，我切胶的时候可能污染了，可是检测出蛋白里面也没有我的目的蛋白呢
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5楼2017-08-15 19:26:29
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