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转身遇到

新虫 (初入文坛)

[交流] 纯化蛋白质谱鉴定

真菌效应蛋白经大肠杆菌原核表达纯化后质谱鉴定,匹配出来的是大肠杆菌的蛋白,可能原因是什么呢?克隆菌株测序是正确的,表达菌株有问题吗?还是鉴定出错了?还是别的原因呢?对这方面还不太懂,希望得到有经验的朋友帮助,非常感谢!

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biosci

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2楼2017-08-12 11:48:46
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转身遇到

新虫 (初入文坛)

谢谢,可是我诱导表达后跑胶有目的条带呢,那条带不是大肠杆菌表达的吧

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3楼2017-08-12 12:00:10
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biotpack2

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
克隆对而且诱导以后有蛋白表达,应该就够确定转入的蛋白有表达。至于鉴定出大肠杆菌蛋白,有可能是你制备的蛋白样品不够纯,里面混杂了比较多大肠杆菌的蛋白,因此,鉴定到大肠杆菌的蛋白很正常。建议送蛋白鉴定前,跑胶分离蛋白,蛋白尽量分的开一些,另外制备样品尽量保证使用的器具,溶液都是干净无污染的。但是至于没有坚定到你表达的真菌蛋白,具体要看比对蛋白选用的数据库是否包含了真菌蛋白的数据库,不然是无法鉴定到真菌蛋白的。
4楼2017-08-14 12:08:46
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转身遇到

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biotpack2 at 2017-08-14 12:08:46
克隆对而且诱导以后有蛋白表达,应该就够确定转入的蛋白有表达。至于鉴定出大肠杆菌蛋白,有可能是你制备的蛋白样品不够纯,里面混杂了比较多大肠杆菌的蛋白,因此,鉴定到大肠杆菌的蛋白很正常。建议送蛋白鉴定前, ...

嗯,谢谢,我切胶的时候可能污染了,可是检测出蛋白里面也没有我的目的蛋白呢
5楼2017-08-15 19:26:29
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