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小木耳1

新虫 (初入文坛)

[交流] 用DPNI消化后转化不出来 已有2人参与

做PCR定点突变,电泳鉴定条带基本在孔里或者下面一点,本人条带差不多11000bp,做完6小时消化后转入XL10一个转化子都没有,做了两次了?为什么长不出来,感受态没问题?转其他质粒可以的!

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纷飞的叶

木虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-13 08:58:41
通常消化3小时之后就够了?消化完之后需要回收DNA的,可以用乙醇沉淀法,10-20微升蒸馏水溶解后再取出来做转化

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2楼2017-08-11 18:47:32
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jcstone1027

铁杆木虫 (正式写手)

木虫

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-13 08:58:50
你确定你扩出完整的11000bp了吗,其实可以不用DPNI消化的,因为残留的质粒对转化的影响非常小,不是感受态的问题,你要确定扩出来了才是。
学习,交流
3楼2017-08-12 15:23:19
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