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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用DPNI消化后转化不出来
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小木耳1

新虫 (初入文坛)

[交流] 用DPNI消化后转化不出来 已有2人参与

做PCR定点突变，电泳鉴定条带基本在孔里或者下面一点，本人条带差不多11000bp，做完6小时消化后转入XL10一个转化子都没有，做了两次了？为什么长不出来，感受态没问题？转其他质粒可以的！

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1楼 2017-08-11 17:23:03
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纷飞的叶

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-13 08:58:41
通常消化3小时之后就够了？消化完之后需要回收DNA的，可以用乙醇沉淀法，10-20微升蒸馏水溶解后再取出来做转化

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2楼2017-08-11 18:47:32
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jcstone1027

铁杆木虫 (正式写手)

木虫
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-13 08:58:50
你确定你扩出完整的11000bp了吗，其实可以不用DPNI消化的，因为残留的质粒对转化的影响非常小，不是感受态的问题，你要确定扩出来了才是。
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学习，交流
3楼2017-08-12 15:23:19
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