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[求助]
科学小白，刚入师门，最近在质粒抽提方面遇到了极大的困扰，请大家排忧解难。 已有2人参与
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我最近在做大肠杆菌的转化涂板，可是成效不佳。涂板实验已经做了三次了，第一次长菌了，但是菌落pcr没结果，失败了重来。第二次涂板没有长菌，三种基因四个板子均没有长菌迹象，开始分析认为是没有连接上，后来电泳检测载体，发现载体浓度很低，这可能会成为影响实验的一部分。另外，考虑到是不是引物设计错了，师兄又帮我检测了一下，引物设计是对的。但是没有找到失败的原因。第三次，将初始pcr基因再pcr，获得浓度更高的回收产物，载体用的是二师兄给的酶切成功的载体，进行链接转化后，摇菌离心后发现菌体颜色非黄白色，而是浅黑色，当时怀疑菌落里面是否污染了杂菌（五个管子同时都是这样），我追问师兄，他也未能给出确切答复，只是让我继续涂板看结果再判断。今早来的时候发现还是没有长菌。我用的两种载体，认真选择了氨苄和卡娜的培养基，并且涂板的时候也高度认真，但是仍然不知道错在了哪里。所以希望大家可以伸出援手，授人以渔。谢谢！ 发自小木虫Android客户端 |
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