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求各位前辈帮忙分析一下:PCR产物电泳,出现弥散状和双条带是什么原因
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dpsdxa212
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求各位前辈帮忙分析一下:PCR产物电泳,出现弥散状和双条带是什么原因
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样品1,2,3都是PCR产物。为什么样品1出现弥散状条带,样品3出现双条带
。
2017.8.8 marker问题照片.png
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1楼
2017-08-09 10:13:29
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dpsdxa212
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4楼
:
Originally posted by
cry_2013
at 2017-08-09 13:38:56
如果有目的条带,退火问题在一定范围内都会有目的条带出现,退火温度不同无非就是杂带亮点或弱点,我觉得可能是引物或模板有问题,引物的问题可能性比较大。。。。
多谢指点。的确,我调整了梯度退火温度,确实都是类似结果,原本没有条带的,无论怎么调都一样。现在已经重新设计引物
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10楼
2017-08-10 23:12:43
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jie_1994
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2017-08-11 07:46:27
弥撒可能是样品模板两多了或者循环数多了,有时候酶量过多也会导致调带弥撒;双带可能是引物的非特异性扩增
发自小木虫Android客户端
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2楼
2017-08-09 11:05:42
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dpsdxa212
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2楼
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Originally posted by
jie_1994
at 2017-08-09 11:05:42
弥撒可能是样品模板两多了或者循环数多了,有时候酶量过多也会导致调带弥撒;双带可能是引物的非特异性扩增
多谢多谢,弥散的问题我回去试试。那个双带的问题,请问应该如何解决呢。3个月前,我用这个引物扩PCR是单条带。于是我重新合成的相同的引物去扩,却出现双带。出现双带的引物Tm值 分别为52和51,我尝试了退火温度43,46,51,53,55,58,循环次数为33。全部都有双条带。
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2017-08-09 11:26:21
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cry_2013
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dpsdxa212: 金币+20,
★★★
很有帮助
2017-08-10 23:10:25
如果有目的条带,退火问题在一定范围内都会有目的条带出现,退火温度不同无非就是杂带亮点或弱点,我觉得可能是引物或模板有问题,引物的问题可能性比较大。。。。
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4楼
2017-08-09 13:38:56
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