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总RNA提取不成功 已有1人参与
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为什么每次提取的总RNA用RNase free ddH2O 都溶解不了呢？ 发自小木虫Android客户端 |
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晋鹏
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+5, 鼓励回帖交流 2017-08-09 07:48:18
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1、 可能是菌体量过大导致Trizol量严重不足，一般为100mg/1 ml Trizol。 2、 存在操作过程中蛋白质残留过多的现象是点样口很亮，用氯仿抽提时，尽量不要吸到蛋白层，为保证RNA 的质量，水层可以稍稍多留点；照片说明RNA在 提取过程中降解了，出现了一片Smear。 3、 导致RNA 降解的原因很多，过滤后的菌体用Pbs清洗后是不是用离心的方法收集的菌体。PBS洗涤后有没有把PBS完全吸尽；没吸尽的话可能导致trizol不能完全把菌体中的RNA酶抑制住从而导致RNA被完全降解。 4、 液氮研磨的时间并不重要，最好是快速而充分的研磨才是最必要的，而且中途不能让其解冻。觉得可以了就马上加trizol 一直研磨直至其变得像润肤霜就可以继续下面步骤了重要的是菌体量和 Trizol加的量有多大，如果Trizol加量相对少，就不能很好的裂解组织和细胞，同时也不能很好的保护RNA,RNA会被RNAase降解掉，所以可以适当增加Trizol的量。 5、 再有操作过程是否规范，最好都是用过滤嘴枪头，最好都是经过depc处理tip and tube 使用一次的橡胶手套，全程带口罩等等细节。至于电泳的问题只要是RNA专用的电泳槽， 电泳槽的问题不大，最主要是在提取的过程中RNA降解了。 |
2楼2017-08-08 23:24:29
