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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 转化不成功
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lp123abc

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化不成功 已有1人参与

两个片段做质粒连接后电泳显示部分成功连接，但是导入感受态细胞长的菌挺多，总是pcr没有条带，拿长出来的菌提质粒后做pcr也没有条带，这是什么原因，已经重复了很多次了。

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1楼 2017-08-07 14:31:55
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lp123abc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 781055707 at 2017-08-08 16:33:57
两个片段做质粒连接后电泳显示部分成功连接，这个你是怎么看出来的？发图来看下

15k的marker片段是3k和4k连接上就是7k的条带
转化不成功



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4楼2017-08-10 21:10:33
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)
自连或者抗生素失效。

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2楼2017-08-08 13:23:53
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两个片段做质粒连接后电泳显示部分成功连接，这个你是怎么看出来的？发图来看下
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采菊东篱下，悠然见南山。
3楼2017-08-08 16:33:57
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781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lp123abc at 2017-08-10 21:10:33
15k的marker片段是3k和4k连接上就是7k的条带

...

有酶切后的质粒和片段的单独电泳吗？质粒有3种形态的，超螺旋，单链断裂，线性。也可能是你目的片段上就一个酶切位点被切开，然后就一个位点和质粒连接了。
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采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2017-08-11 07:58:04
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